La fotoactivación de Riboflavina 2', 3', 4', 5'- tetraacetato induce apoptosis en células de carcinoma escamoso

A. V. JUAREZ; E. HAGGI; A TORRES; P. PONS

Cordoba

Congreso; http://www.grupoargentinodefotobiologia.info/grafob2013/documents/IIGRAFOBlibroderesumenes.pdf; 2013

Grupo argentino de fotobiologia

Riboflavina 2', 3', 4', 5'- tetraacetato (RFTA) es un ester derivado de riboflavina (RF), su activación lumínica puede conducir a la fotooxidación de sustratos con la consiguiente generación de radicales intermedios o especies reactivas de oxigeno (ROS). Por esta característica la RFTA podría ser aplicada como fotosensibilizador (FS) en Terapia Fotodinámica (TFD). La TFD es una modalidad terapéutica aprobada para el tratamiento del cáncer, basada en la activación lumínica de un FS localizado selectivamente en células neoplásicas causando su muerte por la fotooxidación de materiales biológicos. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la TFD mediada por RFTA en células humanas de carcinoma escamoso (SCC-13). Se incubaron células SCC-13 en medio DMEM con RFTA (50μM) durante 3h, y se irradiaron con una lámpara de LED`s de alta potencia ( 444 nm, 37 mW/cm2). Se demostró que la RFTA en la dosis empleada no es citotóxica, pero en combinación con irradiación, genera disminución de la viabilidad en forma dosis de luz dependiente (4.5, 9 o 18 J/cm2), medida por la técnica de rojo neutro. Posteriormente se evaluó el tipo de muerte celular, por citometría de flujo con Anexina V-PE y 7AAD y por microscopia electrónica (ME). En el tratamiento fotodinámico se observó un aumento en el número de células Anexina V positivas respecto a los controles y los estudios morfológicos ultraestructurales por ME evidenciaron que las células luego de la TFD presentaron características propias del proceso apoptótico, como condensación de la cromatina, fragmentación nuclear y presencia de cuerpos apoptóticos. Por otro lado, se determinó que la citotoxicidad generada por la TFD con RFTA se debe al aumento de los niveles intracelulares de ROS detectados con 2,7-dihidro dicloro fluoresceína (H2DCFDA) por citometría de flujo y microscopía de fluorescencia. Por último se demostró que el aumento de ROS genera daño oxidativo en proteínas, determinado por el contenido de grupos carbonilos de las proteínas, basado en la reacción con dinitrofenilhidrazina. En base a estos resultados, RFTA podría ser un efectivo FS en TFD, ya que genera un aumento en los niveles de ROS causando la oxidación de proteínas y la subsiguiente muerte de las células cancerosas por un proceso programado: apoptosis.