DIFERENTES PATRONES DE MUERTE CELULAR INDUCIDOS POR LA IRRADIACIÓN DE RIBOFLAVINAS EN CÉLULAS DE CARCINOMA ESCAMOSO

JUAREZ V; BOETTO N; TORRES A; P PONS

Córdoba

Jornada; XIII Jornadas de Investigación Cientifica de la Facultad de Ciencias Médicas; 2012

Facultad de Ciencias Médicas

La Riboflavina (RF) es un compuesto vitamínico hidrosoluble y un eficiente fotosensibilizador (FS), que al ser excitado, puede actuar por mecanismos fotoquímicos: tipo I y tipo II produciendo especies reactivas del oxígeno (ROS), que culminan con la muerte celular; por lo que podría ser utilizado en Terapia Fotodinámica (TFD). La TFD es un tratamiento antitumoral que se basa en la muerte celular luego de la activación lumínica de un FS. Para obtener un compuesto liposoluble que penetre con mayor eficacia las membranas biológicas, se acetiló la RF obteniendo un ester lipofílico (RFL). El objetivo de este trabajo fue evaluar comparativamente el efecto citotóxico de la activación de RF y RFL, en células humanas de carcinoma escamoso (SCC-13). Mediante espectrometría se determinó la mayor absorbancia de ambos compuestos y se construyó un emisor con 24 LEDs (Light-Emitting Diode) de alta intensidad (1w) de 444nm de longitud de onda λ. Las células fueron incubadas en medio DMEM con RFL o RFH (50 y 100µM/30, 60, 120, 240min) e irradiadas a densidades de energía crecientes. La viabilidad celular se determinó mediante la técnica de rojo neutro y la proliferación celular por inmunocitoquímica de Ki-67. Para detectar células apoptóticas se realizó la tinción nuclear con Hoechst 33342. Los estudios morfológicos se realizaron por microscopia óptica de alta resolución (MOAR) y microscopia electrónica (ME). Análisis estadístico ANOVA-Tuckey. La exposición lumínica de ambas RF produjo disminución en la viabilidad celular en forma dosis dependiente, no detectándose en oscuridad efectos citotóxicos. La proliferación celular disminuyó respecto a los controles y la fluorescencia nuclear con tinción de Hoechst 33342 demostró que las células tratadas generan apoptosis. Por MOAR y ME se observó en algunas células condensación marginal de la cromatina en la periferia nuclear y formación de cuerpos apoptóticos. Otras células presentaron el típico aspecto de muerte por necrosis, es de destacar un tercer tipo de respuesta celular que muestra leve vacuolización y fragmentación del citoplasma, con núcleo y membrana plasmática de características normales. Estos resultados demuestran que ambos FS podrían ser eficaces en la aplicación de TFD en tumores superficiales de piel.