Efecto de la Terapia Fotodinámica con Riboflavina en células de carcinoma escamoso

JUAREZ, ANDREA V ; BOETTO, NÉSTOR; TORRES, ALICIA; PONS, PATRICIA

Córdoba

Congreso; XI Encuentro Latinoamericano de Fotoquímica y Fotobiología; 2012

La Terapia Fotodinámica (TFD) es una modalidad terapéutica basada en la fotooxidación de materiales biológicos inducido por la activación lumínica de un fotosensibilizador (FS) localizado selectivamente en células neoplásicas. Tras la irradiación de dichas células con una luz de adecuada longitud de onda y en dosis suficiente se induce la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) que promueven la muerte celular [1, 2] .La Riboflavina (RF) es un eficiente fotosensibilizador por lo que podría ser utilizado en TFD, ya que su activación puede conducir a la fotooxidación de sustratos y a la consiguiente generación de radicales intermedios (mecanismo tipo I) o a la generación de oxígeno singlete (mecanismo tipo II) [3, 4]. El objetivo de este trabajo fue evaluar la respuesta de células de carcinoma escamoso (SCC-13) a la TFD mediada por RF y por un ester derivado (RFe) determinando el tipo de muerte celular. Con la finalidad de constatar la generación de ROS por RF y RFe a λ444nm se utilizó 3OH piridina y 9,10-dimetilantraceno (DMA), drogas que se descomponen ante el 1O2. En presencia de RF e iluminada por 30 seg la señal de absorbancia de 3OH piridina decayó 28% mientras que DMA con RFe iluminada 2seg disminuyó 78,7% demostrando que ambos fotosensibilizadores irradiados con la lámpara empleada generan 1O2. Células SCC13 fueron incubadas en medio DMEM, con RF o RFe (50µM, 2h) e irradiadas con una lámpara de LED`s de alta potencia (444nm, 37mW/cm2). Se estudió la viabilidad celular por la técnica de rojo neutro y la proliferación celular por incorporación de Bromodeoxiuridina. Para evaluar los cambios en la morfología nuclear típicos de apoptosis se realizó la tinción nuclear con Hoechst 33342. Los estudios morfológicos se realizaron por microscopia óptica de alta resolución (MOAR) y microscopia electrónica (ME). Los niveles de ROS intracelulares se detectaron con 2,7-dihidro dicloro fluoresceína (H2DCFDA). Estadística ANOVA-Tuckey. La viabilidad de células sometidas a TFD con ambas RF disminuyó respecto a los controles en forma dosis de luz dependiente. El tratamiento fotodinámico con ambos Fs generó una disminución en la tasa de proliferación celular. La fluorescencia nuclear demostró que el tratamiento fotodinámico genera condensación de la cromatina y fragmentación nuclear característicos del proceso apoptótico. Por MOAR y ME, los núcleos celulares presentaron condensación y marginación de la cromatina en la periferia nuclear, además se observaron numerosas células con formación de cuerpos apoptóticos. Células sometidas a TFD con dosis lumínicas mayores, presentaron vacuolas citoplasmáticas, alteraciones de las organelas y a menudo ruptura de la membrana plasmática concomitante con un proceso necrótico. RFe generó mayor producción de ROS en la línea celular en comparación con RF. En ausencia de activación lumínica RF y RFe no presentaron ningún efecto citotóxico detectable. Estos resultados sugieren que ambos compuestos estudiados podrían ser eficaces fotosensibilizadores en la aplicación de TFD.