Purificación y caracterización parcial de un inhibidor de proteasa proveniente del mesocarpo y endocarpo de Solanum melongena

GUTIERREZ GONZALEZ, JESSICA; CISNEROS, JOSE S.; TELLECHEA, MARIANA; OBREGON, WALTER D.

Rosario

Simposio; XI SIMPOSIO ARGENTINO, XIV SIMPOSIO LATINOAMERICANO DE FARMACOBOTÁNICA; 2013

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas Universidad Nacional de Rosario

Los inhibidores de proteasas (IPs) son moléculas cardinales que en los últimos tiempos están siendo utilizadas en el diseño de diversos fármacos para inactivar proteasas blanco involucradas en procesos patológicos e inhibir otras que son esenciales en el ciclo de vida de organismos invasores que causan infecciones y enfermedades. En el reino vegetal son escasos los estudios referidos a IPs de naturaleza peptídica. Solo se han reportado en las familias Solanaceae, Graminaceae y Leguminaceae. Dentro de la familia Solanaceae los más estudiados pertenecen a la especie tuberosum, mientras que no existen importantes reportes sobre melongena, a la cual se le han atribuido en Asia y en algunas comunidades indígenas de América del Sur y el Caribe, propiedades medicinales frente a enfermedades del hígado, dolores crónicos en las articulaciones, abscesos e inflamaciones de los ganglios inguinales, entre otras. Por esto se pretende aislar inhibidores de proteasas de manera específica del mesocarpo y endocarpo del fruto de Solanum melongena. Se obtuvo un extracto por el procesamiento de 0,975 Kg del fruto sin cáscara y en presencia de 2 L de buffer de Acetato de Sodio 0,1 M, EDTA 5 mM, PVP 1 %P/V, cisteína 10 mM, pH 5,5 con posterior filtrado y centrifugado. Así se obtuvo una preparación enriquecida en proteínas la cual denominamos extracto crudo (EC). Se determinó la actividad inhibitoria del EC frente a proteasas de distintos tipos mecanísticos (Serinproteasa, Metalocarboxipeptidasas, Cisteinproteasas). Se realizaron cromatografías de afinidad empleando matrices conteniendo Papaína, Carboxipeptidasa A (CPA) y Tripsina inmovilizadas en geles de glioxilagarosa, respectivamente. Se determinó la actividad inhibitoria de las fracciones eluídas frente a cada enzima, encontrándose apreciable actividad inhibitoria solo en el caso de Tripsina. La fracción aislada fue caracterizada mediante electroforesis SDS-PAGE obteniéndose una única banda de un peso molecular de 15 kDa. Finalmente se procedió a realizar una curva dosis-respuesta donde se determinó que la concentración de inhibidor que disminuye la actividad enzimática a un 50 % de la actividad inicial (i0.5), es de 1,1 ug de proteína/ml de medio de reacción. Proponemos en siguientes investigaciones determinar la potencial actividad biológica de esta fracción inhibidora de tripsina.