Caracterización de inhibidores de proteasas aislados de papas andinas (Solanum tuberosum subespecie andigenum) como potenciales moléculas nutracéuticas

CISNEROS, JOSE S.; ROMAN, MARIA CLARA; ROCHA, GABRIELA; PARISI, MONICA; OBREGON, WALTER D.

Rosario

Simposio; XI SIMPOSIO ARGENTINO, XIV SIMPOSIO LATINOAMERICANO DE FARMACOBOTÁNICA; 2013

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas Universidad Nacional de Rosario

Los inhibidores de proteasas (IPs) son moléculas que representan una eficiente vía de control de la actividad de proteasas endógenas que necesitan ser balanceadas para obtener una proteólisis controlada. El reino vegetal ha sido escasamente explorado en relación a su extraordinaria riqueza y biodiversidad; por lo que resulta de sumo interés la búsqueda de nuevas moléculas naturales capaces de modular la actividad biológica de proteasas y microbios involucrados en la conservación de los alimentos. El objetivo general de este trabajo es el aislamiento y caracterización de IPs presentes en extractos de papas andinas con potencial aplicación en la conservación alimenticia pues se ha observado que los inhibidores de origen vegetal afectan el crecimiento de microorganismos patógenos, convirtiéndolos en excelentes agentes antimicrobianos. Con el fin de aislar los IPs presentes en papas andinas se trituraron los tubérculos en frío, resuspensión en agua y posterior centrifugación diferencial (5000 y 13000 rpm durante 1 y 2 horas respectivamente). Los sobrenadantes obtenidos fueron denominados extracto crudo (EC). Se encontró que estos extractos presentaban estabilidad en un rango amplio de pH y concentraciones de NaCl. Por otra parte, se evaluó la estabilidad de los extractos crudos sometidos a tratamiento térmico a 60, 70, 80 y 90°C y se observó que los IPs de tamaño molecular inferior a 30 kDa mostraban buena estabilidad térmica hasta los 70°C. Se estudió también la actividad antimicrobiana del EC tratado térmicamente a 60ºC, observándose que los mismos presentaban inhibición del crecimiento bacteriano (Staphylococcus aureus, Salmonella enteritidis, Escherichia coli y Pseudomona aeruginosa) y del hongo fitopatógeno Phytophtora capsici. Finalmente, se realizó la purificación de los inhibidores por cromatografía de afinidad usando tripsina inmovilizada. Los inhibidores purificados fueron caracterizados por técnicas electroforéticas y proteómicas, identificándose un nuevo inhibidor de tripsina de peso molecular aproximado a 12 kDa con óptima estabilidad térmica y estructural a 70°C. Estos resultados preliminares contribuyen a la búsqueda de nuevos agentes antimicrobianos de origen vegetal con potencial beneficio para la salud y aplicación en el sector agronómico o en la industria de los alimentos.