Biosíntesis de Escopolamina: identificación del gen h6h por PCR en especies del género Brugmansia sp. (Solanaceae)

EUGENIO CÁLCENA; LORENA M. SETTEN; PATRICIA L. MARCONI; MARÍA A. ALVAREZ

Congreso; VII Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO Argentina, II Congreso Internacional REDBIO Argentina; 2009

La enzima hiosciamina 6β-hidroxilasa (H6H, EC 1.14.11.11) interviene en el ultimo paso de la biosíntesis de la escopolamina, alcaloide del tropano sintetizado por algunas Solanáceas utilizado en medicina por su actividad anticolinérgica y antiespasmódica.             Si bien la presencia del gen h6h no resulta en la producción del metabolito en todas la especies del género, existen algunas en las que su expresión genera altos niveles de escopolamina, como es el caso de Brugmansia x candida. A partir de estos datos se propone caracterizar otras especies del género. Para ello hemos comenzado un análisis molecular del gen h6h por PCR, que permita identificarlo y establecer diferencias entre especies. Se realizó un relevamiento entre los Jardines Botánicos del país, encontrándose como especies predominantes, B. arborea, B x candida y B. suaveolens (en dos subformas). A partir de material liofilizado se realizaron extracciones de ADN total, mediante diferentes protocolos. Para realizar las PCRs se diseñaron primers a partir de la secuencia del gen h6h (GenBank AN D26583) de Hyoscyamus niger (Solanaceae), única especie de la cual se posee la secuencia completa del gen. Como resultado se lograron amplificar fragmentos del peso molecular correspondiente al esperado (aprox. 800 pb), observándose algunas diferencias entre las especies analizadas (hasta 100 pb).             A partir de estos resultados se identificarán y caracterizarán nuevas especies potencialmente productoras, para optimizar la obtención de escopolamina por métodos biotecnológicos anteriormente desarrollados por nuestro grupo de trabajo, con B. x candida.