DESARROLLO DE MÉTODOS PARA EVALUACIÓN DE CIRCULACIÓN VIRAL DEL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA

DE CONTI, ERICA; BOADO, LORENA; MADONNI, G; CADENAZZI, G; PEDEMONTE, A; MALIRAT, V; GRIGERA, P; BERGMANN, I

Rosario

Congreso; XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

La Fiebre Aftosa es una de las enfermedades de mayor impacto socio-económico del ganado. En algunas especies susceptibles como el bovino puede generar infecciones persistentes, cuya relevancia epidemiológica es controvertida. A pesar de que no se ha demostrado fehacientemente transmisión de animales persistentemente infectados a animales sanos, la demostración de ausencia de infección persistente o circulación silenciosa es un requisito para el reconocimiento de áreas libres sin o con vacunación por parte de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). Un importante avance para el apoyo a este reconocimiento fue el advenimiento durante la década del 90 de enfoques diagnósticos que reconocen infección independientemente del estado de vacunación o serotipo involucrado, basados en pruebas inmunoenzimáticas que detectan anticuerpos contra proteínas no capsidales inducidas durante la replicación viral pero no por la vacunación. Una limitante para garantizar la correcta interpretación epidemiológica de los resultados consiste en contar con pruebas con alta sensibilidad (que garanticen el reconocimiento de infección tardía con bajos títulos de anticuerpos) y alta especificidad (para no comprometer el valor predictivo positivo especialmente en áreas libres). Estas características pueden ser alcanzadas a través de la aplicación de un algoritmo diagnóstico que incluya una prueba tamiz (actualmente en nuestro país se utiliza un ELISA 3ABC de producción nacional) y otra confirmatoria para los casos de muestras sospechosas. El presente trabajo describe el desarrollo de pruebas confirmatorias que utilizan como sondas serológicas las proteínas recombinantes 3ABC, 3D, 2C, 3A, 3AB y 3B expresadas en E. coli BL21. Las construcciones consideraron enfoques para una eficiente purificación, por ejemplo utilizando el vector pET-30a que incluye un ?tag? de histidina. Una vez expresadas, las proteínas fueron purificadas evaluando diferentes métodos. El desempeño preliminar de varios de los antígenos purificados fue analizado en pruebas de ELISA y/o Western Blot. Se determinó la sensibilidad analítica y diagnóstica para lo cual se ensamblaron paneles de sueros de referencia con distinto grado de reactividad, provenientes de animales con infección persistente confirmada por el método de ?probang? o PCR y/o en la prueba de referencia de OIE. La especificidad diagnóstica fue establecida con paneles de sueros de áreas libres sin y con vacunación. Los resultados demuestran la aptitud de los antígenos recombinantes obtenidos para ser utilizados como sondas serológicas en un test confirmatorio. Este proceso permitirá elaborar un sistema diagnóstico nacional altamente sensible y especifico, desempeño requerido por la situación epidemiológica del país y los requisitos internacionales.