AMPc induce exocitosis acrosomal por la via Epac/Rap

TOMES CN; BRANHAM MT

Mendoza, Argentina

Jornada; VII Jornadas de Investigación; 2005

Facultad de Ciencias Médicas. Universidad Nacional de Cuyo

La reacción acrosómica (RA) es una exocitosis calcio dependiente necesaria para la fecundación. El adenosín-3',5'- monofosfato cíclico (AMPc) es un mediador crucial de este fenómeno. Durante años las proteínas quinasas dependientes de AMPc fueron sus únicos receptores intracelulares conocidos. Recientemente se ha descripto un efector del AMPc llamado Epac, el cual actúa como intercambiador de nucleótidos de guanina para las proteínas Rap. Hemos desarrollado un modelo de exocitosis acrosomal en espermatozoides permeabilizados con estreptolisina O (SLO) que ha posibilitado abordar el estudio de los componentes moleculares y mecanismos de transducción de señales que participan en la RA. En espermatozoides no permeabilizados AMPc induce la RA activando la PKA, quien a su vez abre canales de calcio en la membrana plasmática. En espermatozoides tratados con SLO, la exocitosis disparada por AMPc es insensible a los inhibidores de PKA H89, péptido PKI y RpcAMPS. Así, planteamos la posibilidad de que el blanco del AMPc fuera Epac. Aquí demostramos la presencia de esta proteína en espermatozoides humanos mediante ensayos de Western blot e inmunofluorescencia. La estimulación con un análogo selectivo de Epac indujo exocitosis en una magnitud similar a la alcanzada por el calcio. El AMPc estimula la RA per se y no a través de la movilización o ingreso de calcio puesto que altas concentraciones de EGTA no atenúan el efecto. Anticuerpos específicos contra Epac bloquean la RA, demostrando el requerimiento de esta proteína. La introducción en espermatozoides tanto de anticuerpos anti-Rap, como de un dominio específico de unión a esta GTPasa, previno la exocitosis, sugiriendo la posibilidad de que la vía Epac-Rap fuera crucial en la exocitosis acrosomal. Nuestros resultados sugieren que la activación de la vía Epac/Rap, es suficiente para desencadenar todos los fenómenos inherentes a la fusión