Daño y Reparación del ADN inducido por Taxol en linfocitos de sangre periférica

BRANHAM M T; NADIN SB; VARGAS ROIG L; CIOCCA DR

Mendoza

Otro; Sociedad de Biología de Cuyo; 2002

Sociedad de Biología de Cuyo

Daño y reparación del ADN inducido por taxol en linfocitos de sangre periférica Introducción: El taxol (paclitaxel) es una droga antitumoral, de origen natural obtenida a partir de la corteza de Taxus brevifolia. Se utiliza para el tratamiento de cáncer de ovario, mama, pulmón y sarcoma de Kaposi. El blanco celular del taxol son los microtúbulos. La droga se une específicamente al extremo amino terminal de beta-tubulina impidiendo su ciclo normal de polimerización y despolimerización. Causa la detención del ciclo celular en la fase G2/M, con la posterior activación de los mecanismos de apoptosis. Trabajos previos efectuados en diversos tipos celulares indican que el taxol podría inducir rupturas de simple cadena en el ADN. El objetivo de este trabajo es demostrar si taxol induce daños en el ADN en linfocitos de sangre periférica, y verificar si este daño puede ser reparado. Métodos: obtención de las muestras: se obtuvieron 10 ml de sangre por punción venosa y con jeringa heparinizada de ocho donantes sanos. La separación de linfocitos se realizó en un gradiente de Histopaque 1077. Cultivo de células: las células se cultivaron en medio RPMI 1640 suplementado con 1% de estreptomicina/penicilina, 10% de suero fetal bovino y 0,02% de lectina. Ensayo cometa: se utilizó para estudiar los daños en el ADN inducidos por taxol y evaluar la capacidad de reparación en cada donante. Resultados: se probaron 4 concentraciones de taxol 100 nM, 500 nM, 10 μM y 30 μM durante 4 horas. Se observó que la administración de la droga a una concentración 10 μM incrementó en forma significativa las rupturas en el ADN de las células tratadas. Las concentraciones correspondientes a 100 nM y 500 nM no indujeron cambios importantes respecto de las células control (sin tratamiento con taxol) mientras que la dosis de 30 μM produjo un aumento en el número de células apoptóticas. Por lo cual para calcular la capacidad de reparación del ADN, las células fueron incubadas con 10 μM de taxol durante 4 horas. Luego del tratamiento con la droga, las células se dejaron recuperar a diferentes tiempos (2, 4, 6 y 24 hs). El daño en el ADN fue reparado casi por completo luego de 24 hs de recuperación, observándose valores similares a los de las células control. Discusión: los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que el taxol es capaz de inducir daño a la molécula de ADN. El mecanismo exacto por el cual taxol induce estos daños al ADN se desconoce; podría estar causado por una interacción directa de la droga con el ADN, o por la formación de especies reactivas de oxígeno. En el presente estudio además se demuestra que los linfocitos son capaces de reparar el daño inducido por la droga y que la capacidad de reparación está en función del tiempo