Aceite esencial de Minthostachys verticillata: su utilización como mitógeno para la valoración de la funcionalidad linfocitaria

LAURA N CARIDDI; ADRIANA PANERO; JULIO ZYGADLO; LILIANA I SABINI; ANA M MALDONADO

Córdoba

Jornada; I Reunión de Biotecnología aplicada a plantas medicinales y aromáticas; 2006

Introducción El estudio de la inmunidad celular se realiza en animales o humanos, para investigar el estado funcional de la población linfocitaria y/o la sensibilidad a un antígeno (Ag) determinado. Los estimulantes mas frecuentemente utilizados in vitro para iniciar la proliferación de los linfocitos son: fitohemaglutinina (PHA), concanavalina A (Con A) y el mitógeno de la fitolaca (PWM), entre otros. Minthostachys verticillata (Griseb.) Epling, con nombre vulgar "peperina", es un subarbusto aromático de la Familia Labiatae que abunda en el centro y noroeste de Argentina. En estudios cito-morfológicos, se demostró que D y AE de M. verticillata presentaron índices de proliferación celular similares a PWM. Además se observó, en ensayos de co-estimulación, que tanto D como AE inhibían los efectos linfoproliferativos de PWM (Cariddi L.N., et.al, 2005). El objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos mitogénicos del AE de M. verticillata sobre linfocitos humanos y compararlos con los de PHA o Con A, en ensayos independientes y de co-estimulación. Metodología El AE se obtuvo, a partir de 60 g de hojas secas, mediante destilación por arrastre en vapor de agua utilizando un aparato tipo Clevenger modificado. Las alícuotas de aceite fueron disueltas en dimetilsulfóxido (DMSO) y medio RPMI-1640. Se tomaron muestras de sangre a 20 pacientes alérgicos a hongos ambientales y a 10 individuos no alérgicos (1-20 años de edad). Las muestras fueron colocadas en tubos heparinizados para separar las células mononucleares por gradiente de densidad con Ficoll-Hypaque. El ensayo de proliferación celular se realizó siguiendo el método colorimétrico del MTT y las células fueron estimuladas en ensayos independientes con: 10 μg/ml de PHA, 5 μg/ml de Con A y de AE: 6 mg/ml;  0,6 mg/ml; 60 μg/ml; 6 μg/ml; 0,6 μg/ml; 0,06 μg/ml y 0,006 μg/ml. Por otra parte, en los ensayos de co-estimulación, los linfocitos fueron estimulados con la concentración óptima de AE  adicionada a los cultivos, junto a cada uno  de los mitógenos. Resultados y Discusión El ensayo de proliferación de linfocitos de todos los individuos (alérgicos y no alérgicos) reveló que el AE fue capaz de estimular la división celular en forma similar a los mitógenos probados (p=ns). Cuando se calcularon los índices de proliferación (IP) para PHA, Con A o AE, fueron en todos los casos > 1,30 lo que indicó una significativa expansión celular (Tuchscherer M, et. al, 2002). Además se pudieron determinar aquellas concentraciones de AE que mostraron mayores efectos mitogénicos (60 μg/ml; 6 μg/ml; 0,6 μg/ml y 0,06 μg/ml). Si bien las concentraciones de: 6 mg/ml;  0,6 mg/ml y 0,006 μg/ml,  indujeron proliferación celular, los IP fueron significativamente menores que los IP de las mencionadas anteriormente (p