Utilización de un medio de cultivo para la cuantificación de Azospirillum brasilense y la diferenciación de bacterias presentes en la misma formulación.

MOLINA, ROMINA; OBANDO, MELISSA; TORRES, DANIELA; RIVERA, DIEGO; CASSAN, FABRICIO

Córdoba

Jornada; XV Jornadas Argentinas de Microbiología. Adelantos en el diagnóstico Microbiológico.; 2014

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Azospirillum es uno de los géneros de rizobacterias más estudiados de los últimos años debido a su capacidad de promover el crecimiento en un gran número de especies vegetales de todo el mundo, lo que ha devenido en su utilización desde el punto de vista agronómico. La cepa Az39 de A. brasilense es una de las más utilizadas para la formulación de inoculantes en Argentina y el control de calidad de tales formulaciones, juega un papel clave para asegurar su funcionalidad en condiciones agronómicas. En la actualidad, existen procedimientos validados para la cuantificación de Azospirillium brasilense, que incluyen el procedimiento de recuento y otros procedimientos adicionales para la identificación de microorganismos contaminantes. El objetivo de este trabajo fue el de evaluar un medio de cultivo de fácil preparación, que permitiese integrar el procedimiento de recuento y la identificación de microorganismos contaminantes en una misma secuencia de trabajo. Para ello, utilizamos la cepa Az39 de Azospirillum brasilense como cepa de referencia y las técnicas de recuento por microgota y de siembra en superficie como procedimientos analíticos estándares. El medio de cultivo se formuló sobre la base del caldo Luria Bertani [LB] modificado por la adición de 15g.L-1 del indicador Rojo Congo y 18 g.L-1 de agar y fue denominado LBRC. Para los ensayos, se obtuvieron cultivos en fase exponencial de Sinorhizobium meliloti, Bradyrhizobium japonicum, Pseduomonas protegens y Bacillus subtilis que fueron mezclados en una relación al 50% (v/v) con cultivos en igual fase de crecimiento [DO595=1.0 y aprox. 1x109 UFC.ml-1] de Azospirillum brasilense Az39. Además se consideraron controles de cada microorganismo sembrados de manera individual en los medios propuestos: Rojo Congo [RC]; Nitrogen Free [NFb] y LBRC. Los resultados de nuestros experimentos determinaron que ambos medios, LBRC y RC permitieron diferenciar colonias de Azospirillum brasilense de aquellas formadas por S. meliloti, P. protegens y B. subtilis a diferencia de lo que ocurrió en medio NFb, en el que no se pudieron diferenciar colonias de cada género microbiano. Por otra parte, B. japonicum fue incapaz de desarrollarse en todos los medios propuestos. El medio LBRC tiene dos ventajas considerables con respecto al medio RC considerado selectivo y diferencial para el género Azospirillum: es de fácil preparación y no es selectivo, por lo que permitiría el desarrollo de microorganismos contaminantes con mayores requerimientos nutricionales y no con los comúnmente utilizados para la formulación de inoculantes, como los empleados en nuestros ensayos. En base a estos resultados, proponemos que el medio LBRC es adecuado para el recuento de Azospirillum brasilense y la detección de otros microorganismos en un mismo procedimiento.