Mecanismo de muerte celular inducida por cobre en hepatocitos primarios y fibroblastos embrionarios murinos

SAPORITO MAGRIÑÁ, C; BORNER, C; REPETTO, M

Mar del Plata

Congreso; 60º Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2015

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El exceso de cobre (Cu) a nivel sistémico, como se observa en la enfermedad de Wilson, genera daño y muerte celular en distintos órganos, principalmente hígado y cerebro. La interacción entre el Cu libre y el H2O2 producido por las células generan una situación de estrés oxidativo que desencadenaría la muerte celular. Objetivos: determinar la producción de especies prooxidantes luego de la sobrecarga de Cu y estudiar si la muerte celular ocurre mediante un mecanismo apoptótico, necrótico o mixto. Resultados: en fibroblastos embrionarios murinos (MEFs), 400 μM de Cu son suficientes para producir una disminución de la viabilidad del 40% en 24 horas mientras que los hepatocitos expuestos a 300 μM de Cu muestran cambios morfológicos y muerte celular apreciable. Esta concentración de Cu genera un aumento de la oxidación de la diclorofluoresceina (DCFH) del 500% a las 8 horas. La oxidación de la DCFH es completamente prevenida en presencia de inhibidores de la síntesis proteica como cicloheximida y actinomicina D. La N-acetilcisteina, no es capaz de prevenir la muerte celular, ni tampoco de disminuir la oxidación de la diclorofluoresceina. La deferoxamina, un quelante de Fe3+ fue la única molécula capaz de disminuir la oxidación de la diclorofluoresceina y prevenir parcialmente la muerte celular. La actividad de caspasas no se encontró aumentada ni en hepatocitos, ni en MEFs, como tampoco el clivaje de caspasa 3 por lo cual la muerte celular no involucra una vía apoptótica. El análisis microscópico de los hepatocitos mostro una morfología típica de hepatocitos necróticos y ausencia de cuerpos apoptóticos. Conclusión: la muerte celular inducida por Cu es un evento puramente necrótico y la generación de especies prooxidantes depende del tipo de célula expuesta al metal. La oxidación de la DCFH mediada por la síntesis de una proteína implica una vía distinta a la interacción entre el H2O2 y el Cu libre en la producción de estrés oxidativo al menos en MEFs.