Caracterización Molecular de líneas de Solanum tuberosum transformadas con construcciones génicas que les confieren resistencia a virus

REYES CA

Goiânia- Goiás, Brasil

Congreso; IV Encuentro Latinoamericano de Biotecnología Vegetal; 2001

Red de Biotecnologia (REDBIO). REDBIO 2001

La alta incidencia de problemas fitosanitarios es una de las mayores razones por las que la explotación del cultivo de papa (Solanum tuberosum) con fines nutricionales no es óptimo. Mediante la transformación genética es posible modificar el germoplasma de las especies cultivadas confiriéndoles a estas resistencia múltiple a patógenos. Iporá es un cultivar de papa obtenido en Uruguay, que por sus características fisiológicas y comportamiento sanitario ha alcanzado rápidamente importancia nacional. En la búsqueda de mejorar este material se transformó este cultivar con genes que le confieren resistencia frente a infecciones virales y se evaluó molecularmente clones resultados de esta transformación. Las construcciones utilizadas para la transformación incluyeron a los genes que codifican para la proteína de cápside de LMV y a la replicasa de PLRV que fueron transferidos a fragmentos internodales de papa según el protocolo de Visser et al (1989), utilizando Agrobacterium tumefaciens cepa GV 3101. Una serie de clones de las plantas transformadas, que crecían en medio selectivo con higromicina (15 mg/ml), fueron seleccionados a los efectos de realizar los análisis moleculares que confirmen la integración y permitan determinar el número de copias del transgen integrado así como el nivel de expresión de las proteínas introducidas y su relación con la resistencia de los transformantes al patógeno en cuestión. Con este fin se extrajo el ADN de dichas plantas seleccionadas y se lo sometió primariamente al análisis por PCR utilizando oligonucleótidos específicos para el gen de la replicasa de PLRV resultando positivos dos de los clones evaluados (2T2 y 2T3). Estos clones fueron posteriormente analizados por la técnica de Southern blot que permitió confirmar la integración de los transgenes al ADN genómico y también determinar el número de copias integradas de los mismos resultando ser de tres copias para 2T2 y de una copia para 2T3. Actualmente se realizan ensayos de desafío "in vitro"con una cepa virulenta de PVY a los efectos de correlacionar los resultados anteriores con la resistencia de las plantas seleccionadas.