Generación de plantas transgénicas de Naranjo Dulce que expresan la proteína de cubierta viral del virus de la psorosis de los cítricos (CPsV) para la inducción de resistencia mediada por proteína

ZANEK MC; REYES CA; PEÑA EJ; PLATA MI; COSTA N; GRAU O; GARCIA ML

Boca Chica, República Dominicana

Congreso; V Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología Agrícola, REDBIO 2004; 2004

REDBIO

Psorosis es una grave enfermedad que afecta cítricos en Argentina y Uruguay, se disemina por medio de un vector desconocido causando considerables pérdidas económicas. Ninguna especie cítrica conocida es tolerante a esta enfermedad. El agente causal, Citrus psorosis virus (CPsV), es el miembro tipo del género Ophiovirus. Su genoma, de polaridad negativa, consta de tres RNAs. El RNA 1 contiene dos marcos de lectura abiertos que codifican la RNA polimerasa (280K) y un polipéptido (24K) de función desconocida. El RNA 2 codifica un polipéptido de 54 kDa de función desconocida y el RNA 3 expresa la proteína de cubierta viral (CP) de 48 kDa. Nos propusimos obtener plantas transgénicas de Naranjo Dulce tolerantes o resistentes a la Psorosis mediante expresión del gen de la cápside viral. Segmentos internodales de tallos jóvenes de Naranjo Dulce Pineapple, fueron transformados mediante inoculación con Agrobacterium tumefaciens (EHA105) conteniendo el gen CP bajo el promotor 35S del CaMV. Los brotes regenerados fueron seleccionados por reacción histoquímica para GUS e injertados in vitro sobre un pie etiolado de Citrange Troyer (Citrus sinensis x Poncirus trifoliata). Se realizó PCR de las plántulas crecidas in vitro para confirmar la presencia del gen viral. Aquellas que resultaron positivas se injertaron sobre un pie de Limón Rugoso. Posteriormente al análisis por Southern blot y TAS-ELISA, algunas de las líneas establecidas fueron multiplicadas en invernáculo para utilizarlas en futuros experimentos de desafío. Se obtuvieron quince (15) líneas transgénicas, de las cuales 9 se evaluaron por Southern blot y TAS-ELISA. Las líneas presentaron entre 1 y 3 copias integradas del transgen. El nivel de expresión de la proteína determinado por TAS-ELISA fue variable (entre 2 y 12 veces respecto al control sin transformar) y todos resultaron por debajo de la expresión del cítrico infectado con CPsV en condiciones de invernáculo. No se encontró correlación entre el número de copias del transgén y el nivel de expresión de la proteína. Hemos obtenido quince líneas transgénicas, algunas de ellas multiplicadas sobre plantines jóvenes de invernadero, las cuales serán desafiadas mediante infección con el virus CPsV para evaluar la resistencia y/o tolerancia adquirida.