Inducción del mecanismo de silenciamiento génico post–transcrpcional en Nicotiana benthamiana contra el virus de la psorosis de los cítricos

REYES CA; GODOY D; PEÑA EJ; ZANEK MC; VELÁZQUEZ K; GRAU O; GARCIA ML

Viña del Mar, Chile

Congreso; VI Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología Agropecuaria,; 2007

REDBIO

El virus de la psorosis de los cítricos (CPsV), causa pérdidas económicas en distintas regiones citrícolas del mundo no detectándose resistencia natural a la enfermedad. El desarrollo de plantas trasngénicas que contengan fragmentos de secuencias virales como las denominadas hairpin de RNA (hpRNA), inductoras del mecanismo silenciamiento génico post-transcripcional (PTGS), constituyen una alternativa biotecnológica promisoria de resistencia derivada del patógeno. En este trabajo se generaron dos construcciones, hp54K (conteniendo un fragmento de 436 pb del gen viral 54K) y hpCP (conteniendo un fragmento de 372 pb del gen de cubierta viral cp) utilizando los vectores pHannibal desarrollados por Waterhouse y col. Estas construcciones, subclonadas en vectores binarios, fueron transferidas a Agrobacterium y se transformaron plantas de Nicotiana benthamiana para evaluar el nivel de resistencia adquirida. Se ha obtenido la F2 de 3 líneas hp54K: (1, 5 y 8) y de 2 líneas hpCP: (34 y 73), que fueron seleccionadas por resistencia a kanamicina y confirmadas por expresión del gen reportero GUS y PCR. El ensayo de desafío se realiza utilizando dos sistemas diferentes. Por un lado se infectaron las plantas transgénicas hp con el aislamiento homólogo 90-1-1, analizando el nivel de infección de las mismas comparado con los controles de plantas no transformadas. Resultados preliminares indican mayor infección viral en los controles no transgénicos que en las líneas transgénicas hp indicando probable silenciamiento del virus. Por otro lado, utilizando el vector viral pP2C2S derivado del PVX (Potato virus X) se desarrollaron construcciones que portan los genes completos de CPsV (PVX-CP y PVX-54K) para estudiar la inducción del silenciamiento transitivo en las plantas transgénicas hp generadas. Si el mecanismo de PTGS es inducido eficazmente se provocará la degradación de las secuencias de CPsV incluidas en el vector PVX homólogas al hpRNA y también transitivamente la del resto del genoma de PVX disminuyendo su acumulación en la planta y por consecuencia impidiendo que se manifieste la sintomatología típica del mismo. Mediante estos ensayos se seleccionará aquella construcción mas eficiente en la inducción del PTGS la cual será introducida en plantas cítricas para la obtención de resistencia o tolerancia a CPsV.