Estudio de los mecanismos de alteración del procesamiento de miARN en plantas de naranjo infectadas con el Virus de la Psorosis de los Cítricos (CPsV).

MARMISOLLÉ, FE; GARCIA ML; REYES CA

Simposio; Primera Jornada Argentina de Biología de ARN no codificantes; 2017

Universidad Nacional de Quilmes

Citrus psorosis virus (CPsV) es el miembro tipo del género Ophiovirus, familia Ophiovoridae. Su genoma consiste de tres RNAs de simple cadena de polaridad negativa que codifican para cuatro proteínas: la RNA polimerasa dependiente de RNA (280K) la proteína de movimiento (MP), la proteína de cápside (CP) y una pequeña proteína (24K) cuya función se desconoce.Los microRNAs (miRNAs) han emergido como importantes moléculas regulatorias en diversos procesos tanto en plantas como en animales. En plantas, dichos miRNAs se producen en el núcleo a partir de un transcripto primario y son procesados por la RNasa III nuclear, DICER-LIKE 1 (DCL1) y sus proteínas accesorias SERRATE (SE) e HYPONASTIC LEAVES 1 (HYL1), entre otras. Los virus pueden interferir con las vías del miRNAs del hospedante a nivel transcripcional y/o post-transcripcional, el último incluyendo la biogénesis, el procesamiento o la actividad de estas pequeñas moléculas regulatorias. Existen evidencias que indican que las proteínas 24K y 54K de Citrus psorosis virus (CPsV) tienen actividad de supresión del mecanismo de silenciamiento post-transcripcional (PTGS). También se encontró una regulación negativa en la acumulación de ciertas especies de miRNAs maduras en plantas de naranjo infectadas con CPsV, concomitantemente con una mayor acumulación de sus precursores de miARNs (pre-miRNA) en comparación con plantas sanas.Proponemos al menos dos mecanismos que intenten explicar la alteración en el procesamiento normal de pre-miRNAs en C. sinensis dada por el virus: i. Asociación de proteínas virales a los precursores de miRNAs (pre-miRNAs) que evitan el procesamiento y/o, y ii. Interacción de proteínas virales con proteínas celulares implicadas en el procesamiento de miRNAs (DCL1, HYL1, etc.) que impiden la biogénesis normal.Se analizó la acumulación diferencial de un conjunto de pre-miRNAs conservados (156a, 167d, 171a y 172a) en tejidos de naranjo infectados con dos aislamientos diferentes de CPsV. Dichos pre-miRNAs presentaron una acumulación aumentada en muestras infectadas respecto de sanas. Para el caso de miR156a se estudió también la acumulación de la especie pri-miRNA, se observó que aparentemente no existe una acumulación diferencial en muestras infectadas respecto de las sanas.Se investigaron también posibles interacciones de las proteínas virales (expresadas transitoriamente en N. benthamiana) con los pre-miRNAs. Para esto se optimizó la metodología de RNA immunoprecipitation (RIP). Se observó que la proteína 24K de CPsV interacciona directa o indirectamente con los pre-miRNAs estudiados, pudiendo ser la responsable del procesamiento anormal. Por otra parte, se están analizando posibles interacciones de las proteínas virales con proteínas de la maquinaria celular. Para esto, se están expresando transitoriamente las construcciones 35S:CFP-DCL1, pHYL:HYL-YFP y 35S:SE-YFP y las fusiones virales 24K-RFP y 54K-RFP en N. benthamiana y se evaluará la co-localización celular por microscopía confocal.