Supresión del PTGS por el Virus de la psorosis de los cítricos (CPsV)

PEÑA EJ; REYES CA; ZANEK MC; VELÁZQUEZ K; GRAU O; GARCIA ML

Viña del Mar, Chile

Congreso; VI Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología Agropecuaria, REDBIO 2007; 2007

REDBIO

La psorosis de los cítricos es una enfermedad causada por un Ophiovirus, CPsV (Citrus psorosis virus), un virus tripartito de genoma a RNA de cadena simple y polaridad negativa. El RNA1 codifica la polimerasa viral (280K), y otra proteína de función desconocida (24K), el RNA 2 codifica una proteína (54K) cuya función también se desconoce, y el RNA 3 el gen de la proteína de cubierta viral (48K o CP). El silenciamiento génico post transcripcional (PTGS) es un mecanismo de defensa de las plantas frente a los virus degradando los RNAs virales e impidiendo la multiplicación viral. Las proteínas supresoras del PTGS son la respuesta evolutiva de los virus para evitar su degradación ejerciendo su efecto en distintas etapas del PTGS. Debido a que no se encuentra similitud de secuencia entre las supresoras ya caracterizadas no se ha podido predecir acerca de probables candidatas para el virus de la psorosis. En este trabajo se estudia la capacidad de CPsV de interferir en el proceso de PTGS. Para ello hemos utilizado la línea 16c de Nicotiana benthamiana la cual es capaz de ser “silenciada” para el gen marcador GFP. Mediante ensayos de infección de hojas de esta línea silenciada con extractos de CPsV, hemos observado que en el tejido donde se ha detectado el virus, la expresión de GFP aumenta, sugiriendo que CPsV podría interferir en el mecanismo de PTGS. Para determinar cuál de las proteínas virales está implicada en la supresión del PTGS, mediante agro-infiltración se expresaron las proteínas 24K, 54K y CP en hojas de la línea 16c ya silenciadas, y en la misma línea no silenciada (co-infiltradas con la construcción GFP). Sin embargo, mediante estos ensayos no se observó interferencia con el PTGS como resultó con el virus completo. Otras estrategias para la búsqueda de proteínas supresoras es la expresión de las mismas en vectores virales (Potato virus X, PXV) cuyas construcciones se están secuenciando para su confirmación. Para estudiar el mecanismo de supresión mediante la expresión estable y constitutiva de los genes virales se están realizando transformaciones de Nicotiana benthamiana con los genes 48 y 54K.