Las proteínas 54K y 55K de los ophiovirus CPsV y MLBVV interaccionan in vivo con la proteína Plasmodesmata located protein 1 (PDLP1)

ROBLES LUNA G; PEÑA EJ; DE FRANCESCO A; OCOLOTOBICHE E; BORNIEGO, MB; REYES CA; GARCIA ML

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Virología; 2011

Introducción: El ensanchamiento de las nervaduras (BV, del inglés big-vein) es una de las enfermedades que mayor daño causa en el cultivo de lechuga. En el año 2000 se detectó un virus, denominado entonces Mirafiori lettuce big-vein virus, (MiLBVV) que resultó ser el agente causal de la enfermedad, miembro de la familia Ophioviridae. MiLBVV es un virus multipartito (4 RNAs) con genoma a RNA de polaridad negativa. En el RNA2 se encuentran dos marcos de lectura abiertos (ORF), uno corresponde a una proteína llamada 55K y otro a un polipéptido de 10K codificado en el vcRNA2, la función de ambos se desconoce. Citrus psorosis virus (CPsV) el miembro tipo de esta familia contiene sólo un ORF en el RNA2 que codifica para la proteína 54K. Objetivo: Caracterizar las proteínas virales y determinar su localización subcelular con el objeto de aportar evidencias respecto a su función en el ciclo viral. Metodología: Las proteínas virales fusionadas a proteínas fluorescentes (eGFP y RFP) se expresaron en forma transitoria en hojas de Nicotiana benthamiana por infección con cepas de Agrobacterium tumefaciens conteniendo plásmidos binarios que expresen en planta las proteínas de interés. Luego de 2 y 3 días post agroinfiltración las hojas se observaron en microscopio confocal ó en microscopio invertido para las medidas de Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM). Resultados: Las proteínas codificadas en el RNA2 de CPsV y MiLBVV se localizaron en plasmodesmos ya que colocalizaron con la proteína Plasmodesmata located protein 1 (PDLP1) fusionada a RFP (Thomas et al., 2008) que se utiliza como marcador de plasmodesmos (PD). La proteína PDLP1 pertenece a la familia de PDLPs que se encuentran descriptas como proteínas estructurales del plasmodesmo y regulan el tráfico célula a célula. Las mismas se han descripto recientemente también como proteínas que median el movimiento célula a célula de aquellos virus que se mueven por túbulos (Amari et al, 2010) específicamente mediante interacciones directas PDLP-Proteína de movimiento viral (PM). Dado que estos túbulos se componen de subunidades de la PM, estudiamos la interacción in vivo de la proteína PDLP1:RFP con las proteínas 55K y 54K, y la interacción entre ellas mismas. 54K y 55K interaccionaron con PDLP1, y se detectó interacción 54K-54K y 54K-55K por lo que debe existir un dominio de unión que permite la homo-oligomerización en plasmodesmo. Conclusiones: Las proteínas codificadas en el RNA2 de los ophiovirus estudiados se localizan en plasmodesmo e interaccionan con PDLP1 al igual que en los virus guiados por túbulos. Estos resultados aportan evidencias de que estas proteínas se encuentran involucradas en el movimiento viral célula a célula.