Evaluación del ADN espermático de llamas utilizando azul de toluidina

CARRETERO MI; GIULIANO SM; CASARETTO CI; GAMBAROTTA MC; NEILD DM

InVet

Facultad de Ciencias Veterinarias

Lugar: Buenos Aires; Año: 2009 vol. 11 p. 55 - 63

1514-6634

El colorante azul de toluidina (AT) se une al ADN permitiendo diferenciar espermatozoides de acuerdo al grado de condensación de la cromatina. Los objetivos de este trabajo fueron: poner a punto una técnica que evalúe la condensación de la cromatina espermática de llama, determinar los patrones de condensación para la especie mediante la tinción con AT y determinar si es posible utilizar ditíotreitol (DTT) como control positivo de la tinción. Se ensayaron 2 tiempos de fijación de las muestras con etanol 96 º (2 y 30 minutos) y 3 tiempos de incubación con DTT al 1% (30 seg, 1,5 min y 3 min). Los patrones de coloración observados fueron: coloración celeste (negativos, sin alteración en la condensación normal de la cromatina), violeta claro (intermedios, algún grado de descondensación), violeta oscuro (positivos, alto grado de descondensación). No se observaron diferencias significativas entrelos tiempos de fijación tanto en las muestras con y sin DTT. En conclusión, se logró simplificar la técnica de AT y determinar los diferentes patrones en espermatozoides de llama. Se comprobó que la incubación con DTT se puede utilizar como control positivo de la técnica y para evaluar la susceptibilidad de cada individuo a la descondensación in vitro.