OPTIMIZACIÓN DE MÉTODOS IN VITRO PARA EVALUAR LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE BIOACTIVOS EXTRAÍDOS DE CÁSCARA DE NUEZ PECÁN

GASSER, FB; RIBAS, LE; RENNA, MS; MARELLI, BE; ORTEGA, HH; VAN DE VELDE, F; SAVINO, GH; HEIN, GJ; BARAVALLE, ME

Rosario (Santa Fe)

Congreso; II Reunion Cientifica Internacional, VII Reunion Cientifica Regional y VI Congreso Nacional de la Asociacion Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio (AACyTAL); 2021

AACyTAL

Las pruebasbiológicas se realizan para comprobar la eficacia y seguridad de un nuevo bioactivoy los ensayos in vitro con líneascelulares son ampliamente empleados en estas evaluaciones. Las líneas celularesson utilizadas como métodos alternativos y/o complementarios a la utilizaciónde animales de laboratorio, permitiendo realizar pruebas rápidas y directas,con posibilidad de detección de efectos a largo plazo y con la ventaja decontrolar las condiciones experimentales. Existen evidencias de que losbioactivos extraídos de la cáscara de nuez pecán presentan actividad citotóxicasobre algunas líneas celulares tumorales. El objetivo del presente trabajo fue optimizardistintos métodos in vitro a partirde cultivos celulares para evaluar la actividad citotóxica de bioactivosextraídos de dos variedades de nuez pecán.Los bioactivosfueron obtenidos mediante extracción acuosa a partir de cáscara de nuez pecán (Carya illinoinensis) de las variedades Marameck y Mahan. La actividadcitotóxica y el mecanismo de muerte celular, luego de la exposición de los bioactivospor triplicado sobre cultivos celulares de la línea de adenocarcinoma de colonHT-29, fue determinada a través de la evaluación de viabilidad utilizando MTT yespectrofotometría y análisis de inducción de apoptosis mediante el uso del kitAnexina V y citometría de flujo. La actividad genotóxica se realizó mediante laevaluación de la frecuencia de micronúcleos utilizando tinción con DAPI y microscopíade epifluorescencia. Se utilizó doxorrubicina y peróxido de hidrógeno comocontroles positivos.  Se observó queambos productos poseen actividad citotóxica cuando se los enfrenta a célulasHT-29 y dicha actividad es dependiente de la concentración de bioactivoutilizado, siendo similar para las dos variedades. Los resultados obtenidos indican que ambos bioactivos utilizan lainducción de apoptosis como mecanismo principal de muerte celular, resultando lavariedad Mahan la que induce el mayor el índice de apoptosis (p < 0.05). Respecto a la evaluación de genotoxicidad, como medida del daño al ADN,se observó que los dos bioactivos evaluados poseen actividad genotóxica frentea las células de cáncer de colon de manera similar a la que posee doxorrubicinay menor a la actividad del peróxido de hidrógeno (p < 0.05). Los resultados obtenidos a través de estos ensayos permiten disponer deuna batería de métodos in vitro parala evaluación inicial de distintos bioproductos o fármacos. Por otro lado, losresultados generados permiten considerar a los bioactivos obtenidos de cáscarade nuez pecán, como productos de interés y una alternativa potencial altratamiento de diferentes tipos de cáncer.