APLICACIÓN DE QUANTUM DOTS COMO BIOSENSORES DEL DAÑO INDUCIDO POR PRESERVACIÓN HIPOTÉRMICA EN EL TRANSPORTE ENDOCÍTICO. EVALUACIÓN EN CULTIVO PRIMARIO DE HEPATOCITOS DE RATA.

PAULA HOVANYECZ; VALERIA SIGOT; JOAQUÍN RODRÍGUEZ; EDGARDO ELVIO GUIBERT

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

El transporte endocítico mediado por receptores requiere la integridad de las membranas celulares para la activación e internalización de complejos ligando-receptor. Esta integridad se ve alterada durante la preservación hipotérmica (PH), etapa previa a la aplicación en transplante celular. Si bien existen técnicas como el análisis de liberación de lactato dehidrogenasa (LDH) para evaluar la viabilidad celular e integridad de la membrana, permitiendo sólo una cuantificación global del daño. En este trabajo se propone la evaluación de la injuria celular inducida por frío monitoreando el transporte endocítico a nivel de células individuales luego de la PH seguida de reoxigenación normotérmica (RN). Utilizando nanopartículas fluorescentes, Quantum Dots (QDs) conjugadas al ligando factor de crecimiento epidérmico (EGF), se siguió la internalización mediada por receptor de los complejos preformados biotina-EGF:estreptavidina-QDs (EGF-QDs). El sistema se evaluó en cultivo primario de hepatocitos de rata (HC) y preservados (HP) a 4°C en solución de la Universidad de Wisconsin.   Grupos experimentales Incubación con complejos QD-EGF a 37°C HC24 ·   5 min. y 120 min. ·   5 min. QD sin ligando (control). HP24 y HP72 unión (t0) ·   5 min. HP24 y HP72 t120 ·   120 min. RN (37ºC, 5% CO2).                 El % de liberación de LDH en los HC24 y HP24 (t0 y t120) y HP72 (t0) (19±7 (n=7), 5±3 (n=7), 11 (n=2) y 9 (n=2) %, respectivamente) no reveló daño celular, lo cual se correlaciona con el análisis microscópico que mostró tanto la unión como la internalización de los complejos. No se observó unión inespecífica de los QDs no conjugados a EGF. El daño en la membrana se observó en HP72 t120 con un 91±5 % de liberación de LDH (n=2). Los QDs inicialmente unidos en HP72 t0 no fueron internalizados luego de la RN. Mediante esta técnica los QDs podrían ser utilizados como sensores del daño inducido por la PH en la capacidad para el transporte endocítico de hepatocitos previo a su aplicación en trasplante celular.