Estudio in vivo de la dinámica de migración del pLLP de pez cebra. Efecto del EGTA

SAMPEDRO, MARÍA F; SIGOT, V

Encuentro; I Encuentro de Zebrafish en Red Argentina (ZebRA); 2023

Por su simplicidad estructural y accesibilidad para análisis microscópico, el primordio de la línea lateral posterior (pLLP) de pez cebra se ha establecido como un poderoso modelo in vivo para estudiar migración celular colectiva. La morfogénesis de la línea lateral ocurre paralelamente al desarrollo de la epidermis, y el pLLP migra por debajo, haciendo contacto con la misma entre las 18 a 42 hpf. Durante su movimiento, las células se desplazan coordinadamente, proliferan y establecen nuevos contactos célula-célula.Manteniendo su integridad epitelial, mientras las uniones adherentes (UAs) mediadas por cadherina epitelial (cadh-E), se remodelan dinámicamente. Cadh-E, es una molécula de adhesión celular dependiente de Ca2+, crucial para mantener la integridad física de los epitelios.Hoy existe escasa bibliografía que muestre el efecto in vivo del ácido egtázico (EGTA), como quelante de Ca2+ y desestabilizante de UAs en epitelios en pez cebra. Evaluar su rol, nos permitirá entender la relevancia de cadh-E en este modelo de migración colectiva.Para llevar a cabo este estudio, se utilizaron embriones de 27-30 hpf que expresaron transitoriamente cadh-E-EGFP. Los embriones tratados se incubaron en una solución de EGTA 25 mM a 28,5ºC durante 15 y 30 min.El monitoreo dinámico de cadh-E fue caracterizado mediante la aplicación de la técnica de velocimetría de partículas basada en imágenes (PIV), en FIJI. Como resultado, luego del tratamiento con EGTA, el pLLP se mueve significativamente más rápido que los controles, manteniendo la direccionalidad rostro-caudal de la migración. Además, las velocidades revelaron heterogeneidades espacio-temporales a lo largo delpLLP, y fluctuaciones temporales a lo largo del periodo analizado. Seguidamente, esto se evidenció en patrones de velocidades regionales distintivos, con un efecto más evidente en las células de la región media y trasera del pLLP. Paralelamente, se analizó la distribución de cadh-E-EGFP a lo largo del pLLP. El monitoreo de cadh-E-EGFP como trazador para el análisis PIV, podría permitir correlacionar la velocidad con un grado de epitelialización celular a escala regional, en el pLLP.Este estudio podrá contribuir a entender procesos como la organogénesis, regeneración de tejidos y procesos patológicos que involucran mecanismos migratorios análogos, como las metástasis tumorales.