SEPARACIÓN Y ANÁLISIS DE LOS POLIPÉPTIDOS CONSTITUYENTES DE LA GLOBULINA-P DE AMARANTO. DESARROLLO METODOLÓGICO

QUIROGA, ALEJANDRA V; FANTOZZI, M. CINTIA;; MARTÍNEZ, E. NORA; AÑÓN, MARÍA C

Congreso; IX Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2002

Las proteínas de almacenamiento de semillas poseen una compleja estructura cuaternaria. Un ejemplo de estas proteínas lo constituye la golbulina-P(Gp) de amaranto. Es fundamental para poder estudiar la estructura de estas proteínas y relacionarla con la funcionalidad de las mismas, aislar y caracterizar a los polipéptidos que las componen. Estudios previos a este trabajo analizaron la posible separación de las subunidades que forman a la Gp a través de técnicas cromatográficas. Sin embargo no se logró con esta metodología el grado de purificación requerido. Con el propósito de alcanzar una separación de los polipéptidos de Gp adecuada para su posterior caracterización nos planteamos en este trabajo el desarrollo de un método utilizando la técnica de electroforesis preparativa (EP).Se utilizó un equipo Bio Rad con geles de distinta concentración de poliacrilamida y un sistema buffer al que se le adicionó alternativamente diferentes compuestos (SDS, DTT, urea y CHAPS). También se utilizó cromatografía de intercambio iónico y otras técnicas electroforéticas. Mediante EP en presencia de SDS y DTT se obtuvieron polipéptidos suficientemente puros, sin embargo, la presencia de SDS en las fracciones, representó un obstáculo en la posterior determinación de ciertas propiedades como por ejemplo el punto isoeléctrico. Se procedió a la eliminación del SDS utilizando una resina de intercambio iónico AG11A8 obteniéndose fracciones con una baja recuperación de los polipéptidos.Se llevó a cabo un diseño alternativo reemplazando SDS por urea adaptando la concentración de acrilamida a estas nuevas condiciones. Se obtuvieron así polipéptidos con distinto grado de pureza pero en una forma adecuada para su posterior caracterización. Estos resultados mostraron a ambas metodologías como complementarias, permitiendo en su conjunto la purificación de la mayoría de los polipéptidos de la Gp en condiciones para su caracterización.