INVESTIGADORES
CARDILLO Natalia Marina
congresos y reuniones científicas
Título:
Obtención y evaluación de productos de excreción- secreción (ES) de larvas de T. cati de huevos provenientes de materia fecal felina.
Autor/es:
CARDILLO NATALIA , CÉSPEDES GRACIELA*, SANTILLÁN GRACIELA* , SOMMERFELT IRMA
Lugar:
Foro Cultural Universitario de la Universidad Nacional del Litoral
Reunión:
Otro; XXIII Reunion Cientifica Anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Protozoología
Resumen:
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La Toxocariosis
es una de las enfermedades parasitarias de mayor prevalencia en caninos y
felinos a nivel mundial. Las especies Toxocara
canis y cati tienen potencial
zoonótico, representando un riesgo en Salud Publica. Existe poca
evidencia del comportamiento biológico de T.
cati y de la respuesta inmunológica de los hospedadores, puesto que en las
ultimas décadas, la mayoría de los estudios han sido realizados sobre la
especie T. canis.
Los antígenos de excreción-secreción (ES) liberados por las larvas juegan
un papel muy importante en el diagnostico de Toxocariosis humana.
El
objetivo del presente estudio fue obtener y evaluar los productos de ES de
larvas de T. cati provenientes de
huevos recuperados a partir de la materia fecal de gatos naturalmente
infectados. Las larvas libres se obtuvieron por ruptura mecánica de los huevos
y se colocaron en medio de cultivo para la producción de antígenos. El sobrenadante fue recolectado semanalmente,
se determinó una concentración proteica de 506,6 ug/ml por la técnica de
Bradford. Los productos de ES/L2 total
se analizaron mediante la técnica de electroforesis SDS-PAGE y por
Western Blot. Se evaluó la respuesta al tratamiento de los mismos con y sin el
agregado de B-Mercaptoetanol y en diferentes diluciones (10 %, 5 %, 2 %, 0.1 %,
0.05 %, 0.03 %). La membrana fue tratada con una dilución 1:100 de suero
positivo a Toxocara spp. y una
dilución del conjugado 1:6000. La
corrida se realizó en una Mini Protean III (Biorad) y el revelado se
realizó con Diaminobencidina (DAB).
Se realizaron dos geles por prueba, destinándose uno para Western Blot y
tinción de Coomassie, y el otro para la tinción con plata. Las muestras
tratadas con B-Mercaptoetanol mostraron mejor definición de bandas que las no
tratadas. En el Western Blot se observaron bandas de alrededor de 37 KDa, 50
KDa, una intermedia entre la de 50 y 93 KDa, de 93 y 115 KDa, coincidente con
lo observado en la tinción de plata.
De
acuerdo a los resultados obtenidos el antigeno ES de T. cati demostró ser antigénico ya que por la técnica de Western
blot se revelaron bandas de precipitación. Serán necesarios futuros estudios para diferenciar T. canis y cati y poder establecer la
frecuencia de infección de ambas especies en el humano. Por otro lado, la
posibilidad de obtener antígenos de buena calidad y en alta concentración a
partir de larvas de huevos obtenidos de materia fecal animal, será una
herramienta de utilidad en la producción de antigenos para el diagnostico de
Toxocariasis humana.