Estudios Inmunológicos sobre la infección experimental murina con Toxocara cati.

CARDILLO, N.; BRAHAMIAN, M.; SOMMERFELT, I.

Buenos Aires

Jornada; Jornada Investigadores Jóvenes.; 2010

Facultad de Ciencias Veterinarias. UBA.

La Toxocariosis es una de las enfermedades parasitarias de mayor prevalencia en caninos y felinos a nivel mundial, con potencial zoonótico de impacto en Salud Publica. Existe poca evidencia sobre el comportamiento inmunológico de los hospedadores frente a la infección por T. cati. Los antígenos de excreción-secreción (ES) liberados por las larvas juegan un papel relevante en el diagnostico de Toxocariosis humana. Objetivos de la presente tesis doctoral fueron la obtención y evaluación del antígeno ES de larvas de T. cati y la estimación de la respuesta serológica en el modelo ratón. Se obtuvieron larvas de T. cati en cultivo para la producción de antígenos, por ruptura mecánica de huevos. El sobrenadante fue recolectado semanalmente; se determinó una concentración proteica de 506,6 ug/ml por la técnica de Bradford. Los productos ES se analizaron por las técnicas de electroforesis SDS-PAGE y Western Blot, con y sin el agregado de B-Mercaptoetanol. La membrana fue tratada con una dilución 1:100 de suero humano positivo a Toxocara spp. y una dilución del conjugado 1:6000. El revelado se realizó con Diaminobencidina (DAB). Se realizaron dos geles, uno para Western Blot y tinción de Coomassie, y el otro para la tinción con plata. Se utilizaron 38 ratones Balb/ c, 36 fueron inoculados con 1000 huevos larvados de T. cati y 2 destinados como controles negativos. Todos fueron sangrados previo a la inoculación. De los animales inoculados, 30 se utilizaron como controles positivos, siendo sangrados y eutanasiados en número de 3 en los días 7, 14, 21, 28, 35, 42, 63, 84, 105 y 120 post-inoculación. Sus tejidos fueron procesados por la técnica de digestión artificial para la recuperación de larvas migrantes. El grupo de 6 ratones restante se mantuvo como grupo de seguimiento del periodo de infección, siendo sangrados en las mismas fechas p.i. Para la prueba de ELISA se utilizó una concentración de antígeno de 10 ug/50 uL de diluyente, una dilución del conjugado antiIgG 1:1200 y una dilución del suero de los ratones infestados de 1:50. El punto de corte de la prueba de ELISA (0,119) fue estimado mediante el análisis por curvas ROC. De la evaluación del antígeno ES larvario, las muestras tratadas con B-Mercaptoetanol mostraron mejor definición de bandas. En el Western Blot se observaron bandas de precipitación de alrededor de 37 KDa, 50 KDa, una intermedia entre la de 50 y 93 KDa, de 93 y 115 KDa, coincidente con lo observado en la tinción de plata. Los resultados de la técnica de Elisa mostraron un ascenso en la curva de anticuerpos a partir del día 14 (OD: 0.131), un primer pico al día 63 (OD: 0.383) p.i., un leve descenso y un segundo pico al día 120 (OD: 0.408) p.i. Las absorbancias de los sueros negativos fueron inferiores al punto de corte. Se recuperaron larvas de T. cati de todos los animales del grupo control positivo. Los resultados de este estudio aportan nuevos conocimientos sobre el comportamiento serológico de Toxocara cati, demuestra el potencial del antígeno obtenido de larvas de huevos presentes en materia fecal y aporta una nueva herramienta para el diagnostico de Toxocariosis en el humano.