Desarrollo de un microscopio de fluorescencia por absorción de dos fotones

F. COUMANS; M. G. CAPELUTO; M. C. MARCONI; O. MARTINEZ

Rosario, Santa Fe, Argentina

Conferencia; 86ª reunión Nacional de la Asociación de Física Argentina; 2001

La microscopía de dos fotones otorga una excelente técnica no invasiva para la adquisición de imágenes de muestras orgánicas fluorescentes. En este trabajo, se describe la construcción de un microscopio de fluorescencia por absorción de dos fotones para obtener imágenes 3D. Se utiliza como fuente de excitación un láser de Ti:Za que emite pulsos de hasta 30fs de ancho mitad altura y de una potencia media de 0.6W.El haz es enfocado sobre la muestra en un volumen del orden de 1 micrón, que define el tamaño del píxel. Para realizar el barrido del haz de excitación sobre la muestra, se utilizan motores por pasos: uno de ellos controla el movimiento de un espejo que se utiliza para generar un barrido rápido en una de las direcciones del plano; otros dos motores realizan el movimiento en los otros dos ejes a una velocidad menor. La fluorescencia emitida "píxel a píxel" se mide con un fotomultiplicador conectado a un contador universal, lo cual permite obtener la intensidad punto a punto y obtener alta resolución espacial. En este momento del desarrollo de este proyecto se está diseñando un soft para control de los instrumentos y para la adquisición y procesado de las mediciones para constituirlas en una imagen 3D