La enzima 5-lipooxigenasa se induce a tiempos tempranos post-hepatectomía parcial produciendo un reclutamiento temporal de neutrófilos

LORENZETTI, F; VERA, MC; LUCCI, A; COMANZO, CG; CEBALLOS, MP; FERRETTI, AC; CARRILLO, MC; QUIROGA, AD; ALVAREZ, ML

Congreso; XXI Congreso y XXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2019

La 5-lipooxigenasa (5-LOX) es la principal enzima que participa en la síntesis de leucotrienos (LTs). El LTB4 es un LT involucrado en la inflamación actuando como un potente quimioatrayente de neutrófilos. En un trabajo previo a nuestros estudios se analizó la expresión de genes relacionados con el metabolismo lipídico durante la regeneración hepática y se reportó un notable aumento en la expresión de genes que promueven la síntesis de LTs, incluido el de la 5-LOX. Sin embargo, no se indagó sobre el papel de dicha inducción en la regeneración hepática. Objetivo: Estudiar el rol de los LTs en regeneración hepática posterior a una hepatectomía parcial (HP). Métodos y resultados: Ratas Wistar macho adultas fueron sometidas a una cirugía sham o una HP (70% de hígado removido). Dos horas antes de la cirugía, los animales recibieron un inhibidor específico de la 5-LOX, el zileutón (Zi) 40 mg/kg PC (grupo HP Zi) o el vehículo de la droga (grupo HP control). Los estudios se realizaron a 1, 3, 5 y 24 h post-cirugía. Se verificó la inhibición de 5-LOX determinando los niveles intrahepáticos de LTB4 con un kit ELISA en los hígados removidos (tiempo cero post-HP). Interesantemente, se observó un incremento en los niveles de LTB4 a 1h post-HP (+101%*), junto con un incremento en los niveles proteicos de la 5-LOX analizados por western blot (+66%*) en los animales HP control respecto al grupo sham. Esta inducción fue bloqueada parcialmente en el grupo HP Zi. El índice de proliferación (inmunohistoquímica (IHC) de PCNA) mostró una disminución significativa en animales HP Zi (-38%#) en comparación con grupo HP control a las 24h post-HP. En congruencia con esto, los niveles nucleares de ciclina D1 determinados por western blot e IHC también se encontraron disminuidos en las ratas tratadas con Zi en comparación con el grupo HP control (-188%#). Por último, se determinaron los niveles de leucocitos polimorfonucleares (PMNs) a través de IHC de mieloperoxidasa (MPO) y se observó un aumento de la misma en el grupo HP control (+300%*) respecto del grupo sham y una disminución en el grupo HP Zi (-62,5%#) a las 5h post-HP. El análisis por qRT-PCR de la MPO a las 3h post-PH también mostró una disminución significativa en el grupo HP Zi respecto al grupo HP control (-38%#). Para confirmar estos hallazgos, se analizó por inmunofluorescencia y miscroscopía confocal un marcador de neutrófilos de rata y se observó una disminución de las células positivas para este marcador en las ratas tratadas con Zi en comparación con el grupo HP control a las 3h post-HP (-37%#). (*p