Resistencia de hepatocitos aislados de hígados preneoplásicos de rata ante los efectos tóxicos del ácido etacrínico (EA)

PARODY, JUAN PABLO; ALVAREZ, MARIA DE LUJAN; QUIROGA, ARIEL DARIO; RONCO, MARIA TERESA; FRANCES, DANIEL ELEAZAR ANTONIO; MONTI, JUAN ALBERTO; OCHOA, JUSTINA OCHOA; CARNOVALE, CRISTINA ESTER; CARRILLO, MARÍA CRISTINA

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Congreso; LI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2006

“Resistencia de hepatocitos aislados de hígados preneoplásicos de rata ante los efectos tóxicos del ácido etacrínico (EA)”. Parody J.P., Alvarez M.L., Quiroga A.D., Ronco M.T., Francés D., Monti J., Ochoa E., Carnovale C., Carrillo M.C. Medicina (Buenos Aires) 66 (Supl. II), pag 89, 2006.   Glutation S-transferasas (GSTs) participan en la destoxificación de xenobióticos, incluyendo drogas empleadas en terapias anticancer. Catalizan la conjugación de sustancias electrofílicas con GSH, favoreciendo su excreción vía la proteína de membrana canalicular Mrp2. El EA es una droga que causa hepatotoxicidad debido a su metabolismo oxidativo. EA y su GSH-conjugado (EA-SG), son inhibidores de las GSTs. Ratas sometidas al modelo de carcinogénesis química (iniciación-promoción, IP) presentan inducción de la isoenzima GST-P hepática, ausente en ratas control (C). Analizamos el rol del sistema GST/GSH en hepatocitos aislados de ratas IP ante el EA. Los hepatocitos se incubaron durante distintos tiempos (30, 60 y 120 min): a) en ausencia de EA y b) con distintas concentraciones de EA (0,1; 0,5 y 1,0 mM). Observamos una disminución significativa de la viabilidad en hepatocitos C a 60 min y a 120 min con 0,5 y 1,0 mM EA (p<0,05). En hepatocitos IP sólo disminuyó a 120 min y con 1,0 mM de EA (p<0,05). Como medida de integridad celular, la liberación de LDH y GPT al medio de incubación fue menor en hepatocitos IP que en C. Los niveles iniciales de tGSH intracelulares en hepatocitos IP fueron significativamente más elevados que los de C. Por inmunoblotting observamos una inducción de GST-P, ausente en animales C y una disminución significativa de GST alfa y mu en hepatocitos IP. La expresión de Mrp2 fue significativamente menor en hepatocitos IP (15% de C) tanto en fracción membrana plasmática como intracelular. Además, observamos un proceso de internalización más abrupto frente a concentraciones crecientes de EA con respecto a C, con lo cual se favorecería la conservación del tGSH intracelular y su conjugado con EA. Así, mayores niveles de tGSH, menor expresión de Mrp2 y presencia de GST-P y su capacidad de catalizar la conjugación de EA con GSH, serían factores responsables de conferir a los hepatocitos IP un mecanismo de resistencia frente al EA.