Sustancias Oxígeno Reactivas (ROS) y capacidad antioxidante en cultivos primarios de hepatocitos aislados de ratas con cirugía simulada (Sh) y hepatectomía parcial (Hp)

FRANCES, DANIEL ELEAZAR ANTONIO; OCHOA, JUSTINA OCHOA; ALVAREZ, MARIA DE LUJAN; QUIROGA, ARIEL DARIO; PARODY, JUAN PABLO; MONTI, JUAN ALBERTO; CARRILLO, MARÍA CRISTINA; RONCO, MARIA TERESA; CARNOVALE, CRISTINA ESTER

Mar del Plata

Congreso; L Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2005

“Sustancias Oxígeno Reactivas (ROS) y capacidad antioxidante en cultivos primarios de hepatocitos aislados de ratas con cirugía simulada (Sh) y hepatectomía parcial (Hp).” Francés D, Ochoa E, Alvarez ML, Quiroga A, Parody JP, Monti J, Carrillo MC, Ronco MT, Carnovale C. Medicina (Buenos Aires) 65, Supl II, pag 161, 2005.   En trabajos “in vivo”, demostramos que a la hora post-HP existe en el hígado remanente un aumento de ROS. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la producción de ROS y la capacidad antioxidante en cultivos primarios de hepatocitos aislados de Sh y HP. Ratas Wistar machos adultas fueron sometidas a HP (65%) o Sh (n=5 c/grupo) .1h post-cirugía se obtuvieron hepatocitos aislados por el método de perfusión con colagenasa y se sembraron. Se determinaron a 1, 3, 18 y 24 h de cultivo: contenido de ROS (método de fluorescencia utilizando 2´,7´-diacetato de diclorofluoresceína), glutation oxidado (GSSG, método Tietze) y actividades enzimáticas de superóxido dismutasa (SOD, método Beauchamp-Fridovich, expresado como % del Sh considerado el 100%) y catalasa (Cat, método Beers-Sizer, en UI/mg de prot.).*p<0,05 vs el correspondiente Sh. Resultados: ROS: Sh-1h: 555,9±99.8; HP-1h: 601,7±65,1; Sh-3h: 532,3±19,8; HP-3h: 567,7±45,5; Sh-18h: 367,8±49,6; HP-18h: 542,9±34,8*; Sh-24h: 292,9±49,8; HP-24h: 566,5±85,5*. % GSSG: Sh-1h: 100; HP-1h: 96,0±3,9; Sh-3h: 1,87±0,29; HP-3h: 3,46±1,07; Sh-24h: 2,75±0,20; HP-24h: 10,87±0,60*. % SOD: Sh-3h: 100; HP-3h: 98,6±1,5; Sh-18h: 100; HP-18h: 97,2±5,9; Sh-24h: 100; HP-24h: 117,5±2,1*. Act. Cat.: Sh-1h: 406,6±25,3; HP-1h: 419,4±33,3; Sh-3h: 436,3±54,9; HP-3h: 421,0±70,1; Sh-18h: 382,2±35,8; HP-18h: 460,8±17,1; Sh-24h: 415,8±23,6; HP-24h: 620,1±67,1. Conclusiones: A 1 y 3 h no existen diferencias entre hepatocitos Sh y HP lo cual podría deberse al estrés producido por la técnica de obtención. A 18 h comienza una diferenciación entre hepatocitos Sh y HP (sólo en ROS), que se manifiesta en su totalidad a las 24 h (ROS, GSSG y SOD), sugiriendo que a este tiempo de cultivo primario los hepatocitos expresan una diferenciación debida a HP, pudiendo utilizarse en estudios del proceso de regeneración.