Inmovilización de peroxidasa y hematin sobre quitosano con glutaraldehído como agente acoplante.

AGOSTINA CORDOBA; IVANA MAGARIO; MARIA LUJAN FERREIRA

Encuentro; Quinto Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones; 2012

Sociedad Argentina de Biocatálisis y Biotransformaciones

Este trabajo presenta el estudio de inmovilización de peroxidasa del rábano picante (HRP) sobre hojuelas de quitosano a los fines de obtener un catalizador efectivo y reutilizable para su empleo en la decoloración de soluciones acuosas de colorantes fenólicos. En términos comparativos se incluyó en este estudio la inmovilización de la protoporfirina de hierro IX o hematin debido a que estudios previos en sistemas homogéneos han demostrado que constituye un sistema catalítico eficiente y de menor costo que mimetiza la acción peroxidativa de la enzima [1,2]. En ambos casos se empleó glutaraldehído como agente acoplante. La efectiva inmovilización de los catalizadores se determinó mediante medidas de actividad con los colorantes comerciales Rojo de Alizarina S y Naranja II. Por otro lado, se determinó la masa de catalizador soportado por espectrometría UV/Visible de las soluciones de sobrenadantes y de lavado. Se evaluó además la capacidad de adsorción de ambos colorantes sobre quitosano en las condiciones de reacción seleccionadas.  Las hojuelas de quitosano tratadas con glutaraldehído demostraron ser buen soporte para la inmovilización de hematin, alcanzando rendimientos de inmovilización de hasta 95 %; mientras que con HRP los rendimientos de inmovilización fueron apenas del 20 %. Hematin inmovilizado presentó una disminución de la actividad del 22 % en la decoloración de Naranja II y 56 % en el caso de Rojo de Alizarina S con respecto a los sistemas solubles. Por otro lado, HRP soportada demostró ser inactiva en la decoloración de Naranja II aunque se observó actividad en la decoloración de Rojo de Alizarina S. La reacción entre glutaraldehído y hematin se estudió por medio de espectroscopia UV-Visible mediante la cual se observó un paulatino aumento de la absorbacia a 233 nm, lo que se asocia a la formación de enlaces C=C producto de la condensación aldólica de glutaraldehído [3]. Por otro lado, no se detectaron modificaciones en el espectro de Hematin descartando la presencia de enlaces que afecten la estructura de su sitio activo en exceso de glutaraldehído. La relación molar óptima de acoplante:hematin, obtenida en función del rendimiento de la inmovilización y la actividad del catalizador es de 2,4 a 1.