32. AVANCES EN EL DESARROLLO DE UN MÉTODO PARA LA PRODUCCIÓN DE UN INSUMO CLAVE EN LA INDUSTRIA BIOTECNOLÓGICA

CAROLINA, TOULOUMDJIAN; MARIANA, CATONE; ELEONORA, ELHALEM; MONICA, CÓRDOBA ESTEVEZ; LARISA, POZO; VERÓNICA, CESA; M. JULIETA, COMIN; MARTÍN, BLASCO; LUCÍA, GANDOLFI DONADÍO

Buenos Aires

Jornada; TECNO INTI 2017; 2017

INTI

La expresión de proteínas específicas mediante el uso de microorganismos modificados genéticamente es el pilar fundamental de la biotecnología moderna, caracterizada por conjunción de la biología molecular con la microbiología. La bacteria Escherichia coli, es el microorganismo más utilizado en la producción de proteínas recombinantes en bacterias. Entre las herramientas disponibles en este microorganismo, se destaca el promotor del operón Lac, un sistema de control de la expresión de proteínas que es regulado por la presencia de lactosa y el estado metabólico de las células. Éste promotor, activa la expresión de las proteínas codificadas río-abajo en presencia de lactosa o compuestos capaces de mimetizar el rol de la lactosa, como por ejemplo análogos de la alolactosa (galactosa-β-(1,6)-glucosa), responsable de la activación del promotor Lac. En particular resultan de utilidad en esta activación los análogos que son capaces de inducir la expresión sin ser metabolizados por las galactosidasas celulares lo que les permite actuar en forma sostenida. Entre los análogos, el isopropil-β-D-tiogalactopiranósido (IPTG, 1) es el más difundido en la industrial biotecnológica y en I+D. El mercado local para este producto se estima de 30 a 60 kg por año, mientras que el precio medio de mercado en volúmenes industriales es de alrededor de 12000 US$/kg. En Argentina este insumo no es producido localmente y todo el abastecimiento se da a través de las importaciones. Figura 1: Retrosíntesis de IPTG. D-Gal= D-galactosaEl IPTG se obtiene por síntesis química a partir de D-galactosa (Schmidt et al, 1983; Thiem et al, 1993) (D-Gal, Fig. 1). La síntesis química de hidratos de carbono es una herramienta poderosa que permite obtener oligosacáridos puros. El desafío consiste en primer lugar, en obtener los monómeros de construcción con los hidroxilos protegidos regioselectivamente. Posteriormente, a través de un método de glicosidación conveniente se construyen los enlaces glicosídico estéreo(α o β)- y regioselectivamente de manera de ir ensamblando el oligosacárido (Boons, G J, 2002).Este trabajo fue planteado de manera interdisciplinaria entre el Laboratorio de Síntesis Orgánica (INTI-Química) y el Centro de Biotecnología como parte del Programa de Fortalecimiento de la Cadena de Valor de la Industria Farmacéutica y Farmoquímica. Se describen los avances obtenidos en la síntesis del IPTG a escala laboratorio y los ensayos de desempeño realizados al producto obtenido comparado con el IPTG comercial.