Estudio Bioquímico y Molecular de una Mutante de Pseudomonas aeruginosa Deficiente en Actividad Betaína Homocisteina Metiltransferasa (BHMT)

JAVIER FERNANDO MARISCOTTI; FERNANDO LÓPEZ; ANA LUZ SERRA; GLORIA LUCCHESI; ANGELA T. LISA

Viña del Mar

Congreso; REUNION IBEROAMERICANA DE BIOQUÍMICA, BIOLOGÍA MOLECULAR Y BIOLOGÍA CELULAR; 2000

Sociedad de Biología Celular de Chile, Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular, Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular

Pseudomonas aeruginosa es un microrganismo patógeno capaz de utilizar colina y algunos de sus metabolitos derivados como fuente de carbono y de nitrógeno. En estas condiciones se demostró que dimetilglicina (DMG), producto de la actividad betaína homocisteína metiltransferasa (BHMT), es el responsable de la inducción de actividades enzimáticas como colinesterasa, fosfolipasa C y fosforilcolina fosfatasa, involucradas en la patogenicidad de este microrganismo. Paro determinar la importancia de DMG en el metabolismo de P. aeruginosa, se obtuvo una mutante transposicional (ALS-96) afectada en el gen que codifica para la BHMT. Mediante estudios moleculares se identificó el fragmento cromosómico interrumpido por Tn5-751 responsable de la síntesis de la BHMT y se localizaron sitios de corte para diferentes enzimas de restricción. Se clonaron los fragmentos génicos localizados corriente arriba y abajo del transposón Tn5- 751. Se obtuvieron plásmidos recombinantes por ligación entre fragmentos SalI de aproximadamente 5-8 kb del DNA adyacente a los brazos IS50L e IS50R del trasposón. El vector utilizado fue pBluescript, digerido con la misma enzima. Los estudios bioquímicos llevados a cabo con la cepa mutante y la silvestre demuestran la importancia de DMG en la regulación de: i) proteínas relacionadas al metabolismo de colina, como las involucradas en transporte o en la síntesis de DMG (BHMT), y, ii) proteínas relacionadas al metabolismo de Pi sensibles a la presencia en el medio de cultivo de estos compuestos nitrogenados.