Cambios reversibles en la forma celular de eritrocitos humanos asociados a la modulacion del contenido de colesterol en la membrana.

M.J. VÁZQUEZ; M.G. RIVAS; A.M. GENNARO

Santa Fe (Argentina)

Congreso; XXIV Congreso Argentino de Química.; 2002

En trabajos previos hemos caracterizado en detalle la evolución temporal del contenido de colesterol en la membrana de eritrocitos cuando se los trata con soluciones de metil-beta-ciclodextrina (MBCD) (para producir reducción) o con el complejo MBCD/colesterol (para producir enriquecimiento). En el proceso de reducción, en el que se incuban los eritrocitos con solución de MBCD 3mM a 37 ºC, la concentración de colesterol en la membrana decae exponencialmente con un tiempo característico de 1 minuto, llegando a un valor final del 57% del colesterol original. Interesa saber si este valor límite está impuesto por alguna propiedad de la membrana o se debe a la saturación de las moléculas de MBCD disponibles para transportar el colesterol. Para poder obtener reducciones aún mayores, sería deseable la incubación con soluciones más concentradas de MBCD. Sin embargo, el factor limitante es la hemólisis. Como alternativa, se propuso en este trabajo realizar un experimento de doble reducción, consistente en la realización de dos incubaciones sucesivas del mismo paquete celular en idénticas condiciones (37ºC, 30 min, MBCD 3mM). La concentración final de colesterol en la membrana, determinada por un método enzimático colorimétrico, fue del 37% del valor original. Se obtuvieron fotografías de las células originales y tratadas con un aumento de 400x (gota fresca). Se observó que las células reducidas en colesterol presentaban forma estomatocítica, consistente con una reducción de área de la hemicapa externa. Para discriminar si este efecto se debe únicamente a la disminución de colesterol o si la MBCD extrae además fosfolípidos, se realizaron dos experimentos adicionales. En uno de ellos se realizaron dos incubaciones sucesivas del mismo paquete celular. La primera, para reducción, con MBCD 3mM, y la segunda, para enriquecimiento, con MβCD/col (25 mg col/g MBCD), 3mM, ambas a 37ºC y por 30 min. Al final del proceso la membrana alcanzó un enriquecimiento del 20% y los eritrocitos recobraron su forma discocítica y tamaño original, siendo comparables a los eritrocitos enriquecidos sin reducción previa. En el segundo experimento, se incubó un paquete celular en una solución MβCD/col con una menor concentración de colesterol (15 mg col/g MBCD). En este caso, los eritrocitos no sufrieron alteraciones en el colesterol de membrana y la forma celular no sufrió modificaciones. La recuperación o conservación de la forma celular luego de los tratamientos realizados sugiere que en las condiciones de trabajo utilizadas, la MBCD extrae colesterol de la membrana de eritrocitos sin producir alteraciones apreciables en el contenido de los restantes lípidos. Se demostró además que puede extraerse hasta un 60% del contenido total de colesterol manteniendo la integridad celular.