Alteración de la expresión de proteínas relacionadas al metabolismo lipídico en quistes foliculares de vacas lecheras.

GAREIS NC; SIMORÉ M; CATTANEO MOREYRA ML; STASSI AF; ETCHEVERS L; HEIN GJ; REY F

Esperanza

Jornada; X JORNADA DE DIFUSIÓN DE LA INVESTIGACIÓN Y EXTENSIÓN; 2022

Facultad de Ciencias Veterinarias UNL

La enfermedad quística ovárica (EQO) es una de las disfunciones reproductivas más importantes que además se asocia a las vacas lecheras de alta producción. Este trastorno es causado por múltiples factores que incluyen desbalances nutricionales y metabólicos, comprometiendo finalmente a la ciclicidad ovárica1. En trabajos previos de nuestro grupo2, observamos alteraciones de sensores metabólicos en los folículos quísticos, como por ejemplo: disminución en la expresión proteica de intermediarios de las vías de señalización de insulina, aumento en la expresión de enzimas de la β-oxidación, y altas concentraciones intrafoliculares de ácidos grasos no esterificados (AGNE), β-hidroxibutirato (BHB) y colesterol; sugiriendo que estos cambios podrían afectar la normal funcionalidad ovárica, incluyendo al proceso ovulatorio. Durante periodos de alta exigencia metabólica, especialmente durante un balance energético negativo (BEN), se evidencia un marcado incremento de AGNE circulatorios, que pueden utilizarse por los diferentes tejidos de acuerdo a las necesidades energéticas. Al respecto, entre otras vías metabólicas, la β-oxidación de los AGNE origina acetil-CoA, que es un precursor de la síntesis de novo de colesterol en las células foliculares, mediante la hidroximetil-glutaril-CoA reductasa (HMGCoA-R), y se relaciona con el aumento de la esteroidogénesis en células de la granulosa. Además, el acetil-CoApuede dirigirse hacia la síntesis de cuerpos cetónicos, principalmente BHB, por medio de lahidroximetil-glutaril-CoA sintasa (HMGCoA-S). Por otro lado, el acetil-CoA puede emplearse para lasíntesis de novo de ácidos grasos por la acetil-CoA carboxilasa (ACC), que es una enzima determinante en el primer paso de la formación de ácidos grasos y se activaría gracias al aumento de insulina en sangre en condiciones nutricionales favorables. Es importante considerar que ante demandas metabólicas y/o necesidades energéticas, el tejido adiposo secreta diversas proteínas y péptidos bioactivos (ej.: adipoquinas) que actúan local o sistémicamente. Los niveles fisiológicos de dichas moléculas, que incluyen a la leptina, son esenciales para mantener la integridad de eje hipotalámico-hipofisariogonadal, la ovulación, la esteroidogénesis, la correcta implantación embrionaria y la preñez3. La actividad de la leptina es mediada por la unión a su receptor (OBR) detectado en el ovario, en células de la granulosa, de la teca y en cuerpo lúteo.Por último, la ghrelina, es una hormona peptídica secretada principalmente por el abomaso en rumiantes, su concentración circulante aumenta en periodos de BEN y modula su acción a través de la unión al receptor secretagogo GH (GHSR). Tanto la ghrelina como su receptor han sido detectados previamente en ovario bovino4. En base a lo expuesto, nos propusimos evaluar la expresión de proteínas relacionadas al metabolismo lipídico (ACC, HMGCoA-R, HMGCoA-S, OBR y GHSR) en quistes de vacas con EQO y en folículos preovulatorios de vacas controles. Las vacas con EQO espontánea (n = 8) y las vacas controles (n = 8) fueron ovariectomizadas, y los ovarios obtenidos se procesaron histológicamente para luego incluirlos en parafina. Se obtuvieron secciones de 5 μm y sobre éstas se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta, para evaluar la expresión proteica en células de la granulosa (CG) y de la teca (CT). El análisis de las imágenes se realizó mediante el programa Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic). Los diferentes parámetros cuantificados fueron evaluados mediante el programa estadístico SPSS 25.0 (SPSS Inc. USA) aplicando pruebas paramétricas o no paramétricas según correspondiera. Los resultados se muestran en la Figura 1. La expresión proteica de ACC fue menor tanto en CG como en CT de los quistes, respecto a los folículos preovulatorios del grupo control (p < 0,05). La expresión proteica de HMGCoA-S mostró diferencias significativas en CG, siendo menor en los quistes (p < 0,05).Además, en la población de CT observamos una tendencia (p = 0,072) a una menor inmunomarcación en quistes. Si bien no se encontraron diferencias significativas en la expresión proteica de HMGCoA-R (p > 0, 05), observamos una tendencia (p = 0,070) a la menor expresión en las CG de los quistes. No se observaron diferencias significativas en la expresión proteica de OBR y GHSR en ninguna de las poblaciones celulares estudiadas. En un trabajo previo de nuestro grupo2, los quistes mostraron un aumento en la expresión de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK; del inglés- adenosine monophosphate-activated protein kinase), fosfoquinasa capaz de fosforilar e inactivar a la ACC y a la HMGCoA-R, lo que podría relacionarse con la disminución en la expresión de ACC registrada en este estudio (junto a la tendencia a la disminución de HMGCoA-R). Sumado a esto, la ACC también es activada por la insulina, y anteriormente hemos observado en quistes una disminución en su cascada de señalización. Finalmente, si bien la EQO es una enfermedad multifactorial, el equilibrio metabólico a nivel ovárico de las vacas lecheras resulta esencialpara preservar el proceso ovulatorio y la eficiencia reproductiva en general.