EL USO DE MODULADORES DE AMPc AUMENTA LA PRODUCCIÓN Y CALIDAD DE EMBRIONES BOVINOS

MICAELA NAVARRO ; MAGALI WAREMKRAUT; ADRIAN A MUTTO; CAROLINA BLUGUERMANN

BUENOS AIRES

Jornada; V Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA; 2017

Facultad de Ciencias Veterinarias UBA

Uno de los puntos centrales de las técnicas de producción in vitro de embriones (PIV) esobtener oocitos competentes que logren dirigir el desarrollo inicial de un embrión. Lasgametas femeninas obtenidas tanto de ovarios de animales cadavéricos como deaspiración folicular in vivo, poseen diferentes grados de competencia. Este es uno de losmotivos por los que la PIV es un proceso ineficiente en comparación a la producción deembriones in vivo. La maduración prematura del oocito cuando éste es apartado delambiente folicular, resulta en una pérdida de la capacidad funcional de la maquinariacitoplasmática, la cual es necesaria para dirigir las posteriores etapas del desarrolloembrionario.Trabajos previos han propuesto un sistema de maduración in vitro (MIV) en dos fasesque involucra el uso de moduladores de Adenosin Monofosfato Cíclico (AMPc). Estamaduración consiste en una primera etapa donde se utiliza un activador de la AdenilatoCiclasa junto a un inhibidor inespecífico de fosfodiesterasas con el fin de retrasar elcomienzo de la metafase II (MII); y en una segunda etapa donde se utiliza un inhibidorespecífico de la fosfodiesterasa 3A y rhFSH con el objetivo de promover la maduraciónoocitaria en forma sincronizada. De esta forma, al retrasar la reasunción meiótica deloocito, se emulan las vías fisiológicas de la maduración que ocurren in vivo, lo cualresultaría en un aumento de la producción y calidad embrionaria.En este trabajo evaluamos el grado de estrés de oocitos en MII provenientes deltratamiento, analizando transcriptos (ARNm) involucrados en vías de plegado deproteínas y apoptosis por PCR en tiempo real. Adicionalmente, analizamos parámetrosusuales en un sistema de PIV tales como porcentajes de maduración, clivaje, produccióny calidad embrionaria. Por último, se evaluó la calidad citoplasmática de los oocitostratados mediante el análisis de la actividad mitocondrial a distintos tiemposmadurativos.Se observó que el tratamiento bifásico no produjo cambios significativos en genesmarcadores de estrés celular ni en los porcentajes promedio de maduración y clivajeembrionario. Sin embargo, observamos que el tratamiento aumentó significativamentela tasa de producción embrionaria y la calidad de los embriones producidosincrementando los niveles de eclosión, cinética de desarrollo, número de células porembrión, y resistencia a la criopreservación. Además, comprobamos que los embrionesderivados del tratamiento fueron capaces de establecer preñeces. Por último, se observóque los oocitos tratados presentaron mayor actividad mitocondrial a las 7 y 15 horas deiniciada la MIV.En base a estos resultados, podemos concluir que el uso de moduladores de AMPcdurante la MIV aumenta la competencia oocitaria, mejorando la calidad citoplasmáticay obteniéndose una mayor producción y calidad embrionaria.