EFECTO DE ANTIBIÓTICOS ANTI-MICOPLASMA SP. SOBRE EL MANTENIMIENTO DEL ESTADO INDIFERENCIADO, PLURIPOTENCIA, SOBREVIDA Y CRECIMIENTO DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS

ROMORINI LEONARDO; RIVA DIEGO A; BLUGUERMANN CAROLINA; RICHARDSON VIDELA GUILLERMO; FERNANDEZ ESPINOZA DARIO DAMIAN; QUESTA MARÍA; SEVLEVER GUSTAVO EMILIO; MIRIUKA SANTIAGO G

Mar del Plata

Congreso; LVII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

Las células madre embrionarias humanas (CMEH) se de-finen por dos características fundamentales: auto-renovacióny pluripotencia. Su cultivo es complejo y costoso, por ende esindispensable extremar las condiciones de asepsia. Las CMEHsson muy susceptibles a la contaminación por Micoplasma sp., yesta infección altera sus propiedades. Antibióticos, como Plasmo-cinTM (Plasmo) y Ciprofloxacina (Cipro), se utilizan para proteger(profilaxis) o para erradicar la infección por Micoplasma sp. Sinembargo, aún se desconocen los posibles efectos citotóxicosde éstos sobre las CMEHs. Es por ello que el objetivo de estetrabajo es estudiar el efecto de Plasmo y Cipro sobre el mante-nimiento del estado indiferenciado, pluripotencia, supervivenciay proliferación de CMEHs. Las líneas HES5 (H5) y WA09 fuerontratadas con Plasmo 25 ug/ml y Cipro 10 ug/ml durante 14 días(desinfección) o durante 5 pasajes con Plasmo 5 ug/ml (profilaxis).Post-tratamiento, el mantenimiento del estado indiferenciado fueverificado por inmunofluorescencia y RT-qPCR de marcadores deindiferenciación: TRA1-60, TRA1-81, SSEA-4, Oct-4 y Nanog. Paraevaluar la pluripotencia, las CMEHs se diferenciaron y se midieronpor inmunofluorescencia y RT-qPCR los marcadores: Brachyury,Nkx2.5 y cTnT: mesodermo; AFP: endodermo; Nestina y Pax-6:ectodermo. En todos los casos Plasmo y Cipro no afectaron elmantenimiento del estado indiferenciado ni la pluripotencia. Másaún, generamos una línea H5-promotor de Brachyury-GFP yobservamos al día 4 de la diferenciación en cuerpos embrioides(control y tratados) expresión de GFP. No vimos cambios en laviabilidad celular (ensayo XTT) de las CMEhs con ninguno delos tratamientos. Sin embargo, el tratamiento con Cipro 10 ug/ml y Plasmo 25 ug/ml enlentece el crecimiento celular (tamañode colonias y XTT). Finalmente, podemos concluir que Plasmoy Cipro no afectan el mantenimiento del estado indiferenciado,pluripotencia o viabilidad de las CMEHs pero sí la proliferación.