DIFERENCIACIÓN CARDIACA A PARTIR DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIA HUMANAS: OPTI- MIZACIÓN DEL PROTOCOLO CLÁSICO

BLUGUERMANN CAROLINA; ROMORINI LEONARDO; RICHARDSON VIDELA GUILLERMO; QUESTA MARÍA; FERNANDEZ ESPINOZA DARIO DAMIAN; SCASSA MARÍA ELIDA; DENIS EVSEENKO; MIRIUKA SANTIAGO G

Mar del Plata

Congreso; LVII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

La metodología más usada para obtener células cardiacasa partir de células madres embrionarias humanas (hESC por susigla en ingles), comprende la formación de agregados celularestridimensionales (cuerpos embrioides, CEs) a partir de coloniasde hESCs y el posterior aislamiento de las zonas contráctiles quese desarrollan en los mismos. Dicho método de diferenciacion sebasa en el uso de suero fetal bovino, el cual contiene diversosfactores que inducen la diferenciación de las células a los trestejidos embrionarios, ectodermo, mesodermo y endodermo. Con elfin de optimizar el protocolo de diferenciación cardiaca, decidimosimplementar un protocolo que incluya un medio de composicióndefinida; mediante el agregado de factores específicos que dirijanla diferenciación hacia tejido mesodérmico en primera instanciay a mesodermo cardiaco en un segundo paso. Este protocolose basa en el agregado de moléculas específicas en ventanastemporales acotadas. La linea celular utilizada fue WA09 y lasmoléculas cardioinductivas empleadas fueron: Proteína morfogenéticasde hueso 4 (BMP4) y Activina A como inductores deprogenitores de la línea primitiva y del mesodermo; el compuestoIWR-1 como inhibidor de la vía canónica de Wnt, que promuevela diferenciación a mesodermo cardíaco y el factor de crecimientoendotelial vascular (VEGF) que promueve la expansióny maduración de dicha población. Resultados: Al comparar elnúmero de áreas contráctiles obtenidas en este protocolo versusel método clásico de diferenciación pudimos comprobar que elnuevo protocolo denominado de Spin Ces más eficiente en lageneración de las mismas. Las células obtenidas por el mismofueron caracerizadas mediante: 1) Citometría de flujo: 50 % de lascélulas en areas contráctiles fueron MF-20(+) y el 30% cTnT(+).2) Inmunohistoquimica: detectamos areas positivas para MF-20y cTnT en cortes histologicos de Ces completos. 3) RT PCRde tiempo real: Observamos el aumento en la expresion de losmRNA codificantes para MF-20, cTnT, TBX5, GATA4 y NKX 2.5.Conclusiones: El protocolo de Spin-CEs resultó más eficiente en lageneración de Ces que presentan áreas contráctiles. La presenciade moléculas cardioinductivas incrementa la población de célulascardíacas derivadas de hESCs.