ANÁLISIS DE LA RESPUESTA DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS FRENTE AL TRATAMIENTO CON INHIBIDORES DEL CICLO CELULAR

RICHARDSON VIDELA GUILLERMO; BLUGUERMANN CAROLINA; QUESTA MARÍA; ROMORINI LEONARDO; SEVLEVER GUSTAVO EMILIO; SCASSA MARÍA ELIDA; MIRIUKA SANTIAGO G

Congreso; LVII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

Las células madre embrionarias humanas (CMEH) se definenpor dos características fundamentales: auto renovación ypluripotencia. Las CMEH, presentan un ciclo celular particulardonde la fase G1 se encuentra abreviada y el punto de restricciónausente. Células somáticas que han sido reprogramadas(iPs) exhiben también estas particularidades, sugiriendo que estaestructura del ciclo celular es necesaria para el mantenimientode la auto-renovación y de la pluripotencia. El objetivo del presentetrabajo fue evaluar el efecto de inhibidores del ciclo celularfrecuentemente usados para arrestar células somáticas en lasfases S o G2/M, en la línea de CMEH WA-09 con el propósitode establecer una metodología que facilite el aislamiento desubpoblaciones celulares específicas de cada fase. Para ello,utilizamos nocodazol y timidina. Mediante ensayos de citometríade flujo determinamos que el nocodazol es efectivo para lograrel arresto de las CMEH en G2/M. Sin embargo, el número decélulas viables decreció significativamente conforme se aumentóla concentración del inhibidor (desde 50ng/ml hasta 500ng/ml), ajuzgar por la observación microscópica y ensayos de viabilidadcelular (XTT). El tratamiento con exceso de timidina conlleva auna diminución en la sintesis de ADN y ensayos de citometría deflujo realizados a distintos tiempos con timidina (5mM y 10mM)revelaron un aumento en la población de células atravesando lasfases G1 y S temprana, que si bien resultó dosis dependiente, nopermitió una sincronización eficiente. La presencia de timidina noprodujo alteraciones morfológicas ni de vabilidad en las CMEH,a las dosis y tiempos ensayados. Estos resultados sugieren que,a diferencia de lo que ocurre con distintas células somáticas, eltratamiento con nocodazol no es apto para realizar ensayos de sincronización y posterior liberación en CMEH debido a su altacitotoxicidad y que el bloqueo con timidina no permite obteneruna sincronización efectiva.