RELEVANCIA DE LA VÍA DE SEÑALIZACIÓN DE AKT SOBRE LA SUPERVIVENCIA DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS.

ROMORINI LEONARDO; FERNANDEZ ESPINOZA DARIO DAMIAN; BLUGUERMANN CAROLINA; RICHARDSON VIDELA GUILLERMO; QUESTA MARÍA; SEVLEVER GUSTAVO EMILIO; GUBERMANN ALEJANDRA; MIRIUKA SANTIAGO GABRIEL

Mar del Plata

Congreso; - LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica SAIC,; 2011

La reprogramación de células somáticas a Células Madre Pluripotentes Inducidas (CMPi) es un recurso invaluable que permite la generación de células específicas de paciente de cualquier linaje, sin recurrir a material embrionario. Los criterios para su validez son: morfología de células pluripotentes, auto-renovación ilimitada, expresión de marcadores de pluripotencia, downregulación de marcadores de diferenciación, independencia de factores utilizados y conformidad con pruebas de diferenciación. El objetivo fue la reprogramación de fibroblastos a CMPi mediante distintas técnicas y condiciones, comparando eficiencias y caracterizando las líneas.La reprogramación se realizó a través de la introducción de Factores de Transcripción embrionarios, Oct4, Klf4, Sox2 y c-Myc, mediante 2 sistemas lentivirales distintos. Se generaron 3 líneas de aparentes CMPi con colonias morfológicamente similares a células pluripotentes. Se caracterizaron para pluripotencialidad mediante microscopía de fluorescencia, encontrándose presencia de marcadores como Oct4, Nanog, Tra-1-60, Tra-1-81 y SSEA-4 y alta actividad de AP. Para las líneas iPSC1.5 e iPSC6.1 se realizó Real Time PCR de estos marcadores y diferenciación espontánea observándose la presencia de marcadores de las tres capas germinales, como alfa-fetoproteína, actina de músculo liso y Pax6, confirmando la pluripotencialidad in vitro. Para las CMPi iPSC6.1 diferenciadas se observaron zonas contráctiles, con expresión de marcadores cardiacos (cTnT, ANP, Nkx2.5) correspondiente a cardiomiocitos y se comprobó el cariotipo normal. Se compararon eficiencias en la generación de CMPi en distintas condiciones, comprobándose una eficiencia de reprogramación de 0,01% que aumenta cuando las células son neonatales y cuando los fibroblastos son mantenidos en un medio rico en SFB. En conclusión la generación de CMPi es posible a partir de distintas poblaciones celulares y con la utilización de distintos vectores.