REPROGRAMACIÓN DE FIBROBLASTOS EMBRIONARIOS MURINOS PARA LA OBTENCIÓN DE CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS

SOLARI CLAUDIA; LUZZANI CARLOS; LOSINO NOELIA; BLUGUERMANN CAROLINA; FERNANDEZ ESPINOZA DARIO DAMIAN; QUESTA MARÍA; BARAÑAO LINO; MIRIUKA SANTIAGO GABRIEL; GUBERMANN ALEJANDRA

Mar del Plata

Congreso; - LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica SAIC; 2010

La utilización de células madre para tratamiento de diversas patologías se encuentra en creciente estudio. Un factor limitante es su mantenimiento en cultivo preservando su estado pluripotente. Resulta de gran interés encontrar un medio que permita amplificar las células madre embrionarias (CME) y pluripotentes inducidas (CMPI) manteniendo sus propiedades fundamentales. Anteriormente, encontramos que el medio condicionado (MC) por una línea celular de granulosa bovina permite la proliferación de CME murinas (CMEm) y humanas. Nuestros objetivos son estudiarsi el MC permite propagar diferentes líneas de CM manteniendo sus propiedades esenciales y evaluar el efecto del mismo sobre su proliferación. El MC permitió el cultivo en estado indiferenciado de diferentes líneas de CMEm y de CMPI establecidas recientemente en nuestro laboratorio. Las CMEm y CMPI propagadas en MC presentaron morfología típica de colonia indiferenciada y expresaron los marcadores de estado indiferenciado Oct4, SOX2, Nanog, Ssea-1, Ecat1, Rex1 y Klf4 determinados por RT-PCR y/o inmunofluorescencia. Para evaluar su capacidad de diferenciación, obtuvimos cuerpos embrioides (CE) a partir de la línea de CMEm Ainv15 propagada en MC. Estos presentaron morfología típica de CE y expresaron marcadores de las tres capas embrionarias: bIII tubulina (ectodermo), Brachyury y actina de musculo liso (mesodermo), á-fetoproteína (endodermo) y Nkx2.5 y miocardina, (mesodermo cardíaco), determinados por RT-PCR y/o inmunofluorescencia. Por otra parte, las CMEm propagadas en MC presentaron colonias de mayor tamaño. Mediante el ensayo de XTT observamos un aumento en la tasa de proliferación. Actualmente, continuamos la caracterización de las diferentes líneas de CM propagadas en MC y estudiamos las vías de transducción de señales y los factores involucrados en los efectos del mismo. Nuestros resultados muestran que el MC puede ser utilizado para propagar CM preservando sus propiedades y aumentando su proliferación.