Estudio de la adhesión y agregación de Pseudomonas aeruginosa en células epiteliales mediante aproximaciones proteómicas

JESSICA ROSSELLO ; ANALÍA LIMA; MADELÓN PORTELA; ARLINET KIERBEL; ROSARIO DURÁN

Jornada; 8as Jornadas de la Seccional Bioquímica y Biología Molecular Sociedad Uruguaya de Biociencias SBBM; 2013

Pseudomonas aeruginosa (PA) es un patógeno oportunista que causa infecciones agudas severas en individuos inmunocomprometidos. A su vez, las infecciones crónicas con PA, son la principal causa de muerte en individuos con Fibrosis Quística. La formación de biofilms es un factor clave en la resistencia a antibióticos y la cronicidad de la infección. La transición desde una forma de vida planctónica a una agregada y asociada a superficie, es un paso temprano crucial en la formación de biofilms. Recientemente hemos visto que PA forma estructuras multicelulares tipo biofilm cuando se contacta con la superficie epitelial (Lepanto et al 2010) y que la formación de las mismas depende de los niveles del segundo mensajero bacteriano 3´,5´-diguanilato cíclico (c-di-GMP). En particular demostramos que una cepa de PA que sobre-expresa una fosfodiesterasa que degrada específicamente c-di-GMP, es incapaz de formar éstas estructuras multicelulares. A partir de estos resultados nos proponemos estudiar las bases moleculares de la adhesión y agregación de PA sobre la superficie celular. Para ello utilizaremos un abordaje proteómico comparativo de las proteínas presentes en dos poblaciones bacterianas: WT y aquella con bajos niveles de c-di-GMP. Inicialmente nos centramos en proteínas de membrana de PA: Optimizamos un protocolo para la purificación y separación de éstas proteínas en geles bidimensionales y corroboramos que ésta fracción corresponde a proteínas de membrana mediante espectrometría de masa de tipo MALDI-TOF. Las diferencias en los perfiles de expresión proteica entre ambas cepas de PA serán evaluadas mediante herramientas de proteómica cuantitativa, a destacar entre ellas 2D-DIGE.