Análisis proteómico comparativo de dos cepas de Pseudomonas aeruginosa con diferente capacidad de adhesión a superficies celulares

JESSICA ROSSELLO ; ANALÍA LIMA; MADELÓN PORTELA ; ARLINET KIERBEL ; ROSARIO DURÁN

Montevideo

Encuentro; Tercer Encuentro Nacional de Ciencias Químicas; 2013

Pseudomonas aeruginosa (PA) es un patógeno oportunista capaz de causar la muerte a individuos inmunocomprometidos. La formación de biofilms es un factor clave en la resistencia a antibióticos y la cronicidad de la infección. Recientemente hemos visto que PA forma estructuras multicelulares tipo biofilm cuando se contacta con la superficie epitelial [1] y que la formación de las mismas depende de los niveles del segundo mensajero bacteriano 3 ́,5 ́-diguanilato cíclico (c-di-GMP). Demostramos que una cepa de PA que sobre-expresa una fosfodiesterasa específica que degrada c-di-GMP, es incapaz de formar estructuras multicelulares y de adherirse a células epiteliales. A partir de estos resultados estudiamos las bases moleculares de la adhesión y agregación de PA sobre la superficie celular. Para ello utilizamos un abordaje proteómico comparativo en dos poblaciones bacterianas: WT y aquella con bajos niveles de c-di-GMP. Inicialmente nos centramos en proteínas de membrana de PA. Optimizamos un protocolo para la purificación y separación de éstas proteínas en geles bidimensionales y corroboramos que ésta fracción corresponde a proteínas de membrana mediante espectrometría de masa de tipo MALDI-TOF. Las diferencias en los perfiles de expresión proteica entre ambas cepas de PA están siendo evaluadas La evaluación de varios métodos de fraccionamiento nos permitió optimizar un protocolo para la detección de proteínas de membrana de PA. Las diferencias en la expresión de proteínas de membrana entre las dos cepas estudiadas están siendo evaluadas mediante espectrometría de masa de tipo MALDI-TOF/TOF y ESI-Trampa iónica. Agencia Nacional de Investigación e Innovación (ANII, Becario de Post-grado) [1] Lepanto, P.; Bryant, D.; Rossello, J.; Datta, A.; Mostov, K.; Kierbel, A.; Cell. Micro, 2011, 13(8), 1212-1222.