Microdiseño de medios de cultivo para bacterias acido lácticas potencialmente probióticas destinadas a cerdos con proyección a escala industrial

FUSARI M.L.; ACOSTA FEDERICO; FRIZZO L.S.; SEQUEIRA G.; SIRINI N.; ROSMINI M.R.; ZIMMERMANN J.A.; SOTO L.P.

Jornada; VIII JORNADA DE DIFUSIÓN DE LA INVESTIGACIÓN Y EXTENSIÓN; 2020

ABSTRACTEl enfoque tecnológico en la producción de un probiótico, supone establecer condiciones óptimas quepermitan una buena producción de biomasa a gran escala. El medio utilizado para el crecimiento debacterias acido lácticas (BAL) a escala de laboratorio es el Man, Rogosa and Sharpe (MRS), sinembargo, el alto costo que presenta, limita su utilización a nivel industrial y encarece el valor deproductos probióticos destinados a cerdos, desalentando así su implementación en la industria porcina.En este contexto, el aprovechamiento de permeado de suero de queso (PSQ), suplementado de maneraadecuada, ha cobrado importancia como sustrato para el crecimiento de BAL. No obstante, la generaciónde biomasa a bajo costo, supone optimizar la concentración de cada uno de los ingredientes que seutilicen teniendo en cuenta las interacciones que se producen entre ellos y evaluando cómo afectan eldesarrollo de cada microorganismos1. Por lo tanto el objetivo de este trabajo fue determinar un mediode cultivo de PSQ que permita el desarrollo óptimo de la cepa potencialmente probiótica L. agilisDSPV009C a través del estudio de su crecimiento en distintas formulaciones de PSQ.El PSQ (lactosa 85% P/P; proteína bruta 3% P/P; cenizas (Na y Ca) 6% P/P; Arla Food Ingredients S.A. Porteña, Argentina) se utilizó con una concentración de 60 g/L y fue suplementado con sulfato demanganeso (MnSO4) (Anedra, San Fernando, Argentina), extracto de levadura (EL) (Oxoid,Basingstoke, UK), hidrolizado de suero de queso (HS) (obtenido por hidrólisis con Flavourzyme durante4 h a 55°C y pH 6,0), peptona de caseína (P) (Sigma-Aldrich, San Luis, USA) y dextrosa (D) (Anhidrap.a. Biopack). Los ingredientes mencionados se utilizaron en distintos niveles dando origen al siguientediseño factorial: 3 (EL 0 g/L, 4 g/L, 8 g/L) x 3 (HS 0 ml/L, 7 mL/L, 14 mL/L) x 2 (MnSO4 0 g/L, 0,003g/L) x 2 (D 0 g/L, 20 g/L) x 2 (P 0 g/L, 10 g/L) =72 combinaciones posibles. La cepa L. agilisDSPV009C, había sido aislada de intestinos de cerdos sanos y seleccionada por demostrar propiedadesprobióticas in vitro. El crecimiento de la cepa se evaluó en microplacas estériles con 96 cavidades. Cadamedio fue dispensado en un volumen total de 240 mL por cavidad y sembrado al 1 % con un cultivomadre de la cepa en MRS, crecido over night. Medio sin inocular fue utilizado como control negativo.Como control positivo, la cepa fue sembrada en caldo MRS, en las mismas condiciones. El crecimientose midió por absorbancia a 630 nm de longitud de onda cada 30 min durante 24 horas a 37° C en elequipo Multi-Mode Microplate Reader, SynergyTM HT Biotek. Los parámetros de crecimientoanalizados fueron el crecimiento máximo (Nmax), la velocidad máxima de crecimiento (Max V), eltiempo necesario para alcanzar la velocidad máxima de crecimiento (t- Max V), el tiempo de latencia ofase Lag (T Lag), el tiempo necesario para alcanzar el crecimiento máximo (t-Nmax). Las variablesNmax y Max V se estudiaron para determinar la combinación de ingredientes más eficiente para elcrecimiento del microorganismo. Posteriormente todos los parámetros de crecimientos obtenidos en elmedio seleccionado se compararon con el alcanzado en MRS. Los datos fueron analizados mediante unANOVA factorial univariante teniendo en cuenta el efecto individual de cada ingrediente y lasinteracciones sobre la variable dependiente. La prueba de Bonferroni se aplicó para evaluar lasinteracciones significativas. La comparación del crecimiento de la cepa en el medio seleccionado y conMRS se realizó mediante ANOVA de una vía.El análisis de los resultados mostró que los ingredientes EL, D y P (p