DESARROLLO Y VALIDACIÓN DE UN TEST DE ELISA PARA EL DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE PARATUBERCULOSIS EN BOVINOS.

MOYANO RD; ALONSO N.; ROMERO MA; GRIFFA N.; ALVARADO PINEDO, F.; TRAVERIA GE; ROMANO MI

La Plata

Jornada; XII Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2019

Asociación Argentina de Inmunología Veterinario

La paratuberculosis bovina es una enfermedad infecto-contagiosa de curso crónico, causada principalmente por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). A nivel mundial, MAP causa grandes pérdidas económicas en la producción bovina, y además podría tener un posible rol zoonótico. Actualmente, el diagnóstico utilizado para paratuberculosis en el animal en pie es el ELISA, siendo el diagnóstico de certeza el aislamiento bacteriano a partir de materia fecal. Uno de los principales problemas del diagnóstico humoral es la interferencia con infecciones con otras micobacterias del complejo avium y/o del complejo tuberculosis, por lo cual existe mucho interés en la búsqueda de nuevos antígenos diferenciales para mejorar las características del diagnóstico. En este trabajo nos propusimos desarrollar y validar un test de ELISA utilizando poliproteínas con epitopes B de proteínas antigénicas de MAP para el diagnóstico diferencial de paratuberculosis. Para el desarrollo del ELISA se utilizó como antígeno una poliproteína recombinante en base a epitopes B de tres proteínas antigénicas de MAP, el cual fue adsorbido en placas de ELISA Nunc MaxiSorp de 96 pocillos. Para evitar interacciones inespecíficas las placas fueron bloqueadas con gelatina porcina al 0.5%. Los sueros se utilizaron en una dilución 1/200 por duplicado, y como sistema de revelado se utilizó Proteína-G conjugado a HRP (Biorad®) con ABTS. Se realizó la lectura de la densidad óptica a λ=405nm. Como controles positivos de utilizaron sueros de bovinos infectados, confirmados por cultivo bacteriológico, y como controles negativos sueros de bovinos provenientes de establecimientos libres de MAP. Para la validación de la técnica se realizaron 20 réplicas utilizando 5 sueros positivos, 5 negativos y 5 de otras especies animales. Se determinó el coeficiente de variación. Posteriormente se estableció un punto de corte utilizando curvas ROC. El coeficiente de variación obtenido para la validación fue menor a 0,25. El punto de corte se estableció mediante curvas ROC. Se analizaron sueros de animales positivos a tuberculosis (n=15) y paratuberculosis (n=65) y animales de establecimientos libres (n=100), detectándose únicamente los positivos a MAP. Se sabe que el estudio serológico para la detección de paratuberculosis en bovinos es de gran importancia, y que los test convencionales presentan reacción cruzada con sueros positivos a tuberculosis. El presente test logro detectar solo sueros positivos a MAP, diferenciado así los animales con paratuberculosis de aquellos con tuberculosis.