Obtención y caracterización de una mutante de Mycobacterium avium en el operón lprG-p55 asociado a mecanismo de virulencia.

VIALE, M; COLOMBATTI OLIVIERI, MA; MOYANO, R.; MON, ML; IMPERIALE B.; MORCILLO N.; GIOFFRE, A.; PARK KT; DAVIS W.; ROMANO, M.

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología y II Congreso Microbiología Agrícola y Ambiental 2013; 2013

AAM (Asociacion argentina de microbiologia)

Introducción: El operón lprG-p55 de Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium bovis está relacionado con los mecanismos de transporte de compuestos tóxicos. P55 es una bomba de eflujo que le confiere a la bacteria resistencia a varias drogas, mientras LprG es una lipoproteína que se une a glicolípidos triacetilados para actuar como agonista de TLR2 en M. tuberculosis y podría modular la respuesta inmune contra esta bacteria. Las cepas de M. tuberculosis y M. bovis deletadas en el operón lprG-p55 reducen significativamente la replicación de la bacteria. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue obtener una cepa de Mycobacterium avium delecionada en el operón lprG-p55, evaluar su susceptibilidad a compuestos tóxicos y estudiar su persistencia en macrófagos y ratones. Materiales y métodos: La construcción de la cepa de Mycobacterium avium cepa D4ER delecionada en el operón lprg-p55 se realizó por la técnica de transducción especializada utilizando un sistema de infección con fagos recombinantes. Una vez obtenida la cepa mutante se realizaron ensayos de susceptibilidad a bromuro de etidio comparando con la cepa salvaje y con la cinética de crecimiento de cada una en ausencia del tóxico. También las cepas mutante y salvaje se evaluaron ante un panel de drogas antituberculosas de primera y segunda línea. Los ensayos en macrófagos bovinos y murinos se realizaron por infección con la cepa salvaje y mutante y posterior recuento en placa. Los ensayos con ratones se realizaron por infección intraperitoneal e intranasal y se procedió al recuento de UFC en bazo o pulmón, respectivamente. Resultados y conclusiones: La deleción del operón lprG-p55 en Mycobacterium avium D4ER causó hipersensibilidad al bromuro de etidio, el mismo efecto que produjo en la cepa salvaje el agregado del inhibidor de bombas, reserpina. Estos resultados indicarían que este operón en Mycobacterium avium funciona a través de un mecanismo de bomba de eflujo tal como había sido demostrado en micobacterias del complejo M. tuberculosis. La deleción del operón lprG-p55 además hizo a Mycobacterium avium susceptible a drogas antituberculosas de primera y segunda linea como rifampicina, levofloxacina, azitromicina, amikacina, linezolid y rifabutina. La mutación del operón además redujo la virulencia tanto in vitro como in vivo. En cultivo de macrófagos derivados de monocitos bovinos así como también en cultivo de macrófagos murinos J774 la cepa mutante mostró una replicación significativamente menor con respecto a la salvaje a las 48 y 72hs. Resultados similares se observaron en los ensayos con ratones, donde la cepa mutante fue eliminada más eficientemente que la salvaje, tanto en la inoculación intraperitoneal como en la intranasal. Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran claramente que la función de LprG y P55 es necesaria para un correcto transporte de compuestos tóxicos y para la supervivencia de Mycobacterium avium.