Estudo do sistema neuroendócrino gastrointestinal em dourado (Salminus brasiliensis)

PEREIRA, R.; ARAÚJO, J.; COSTA, L.; MOURAD, N.; PAULINO, R.; MENDES, T.; VIGLIANO, F.A.; ROSA, P.

Palmas

Congreso; Aquaciência; 2012

Sociedade Brasileira de Aquicultura e Biologia Aquática (AQUABIO)

O sistema neuroendócrino difuso (SNED) compreende vários tipos de células do trato gastrointestinal, chamadas de células neuroendócrinas (CNEs), que produzem e secretam vários hormônios gastrointestinais, conhecidos como neuropeptídeos. Estas moléculas possuem diversos efeitos sobre o comportamento alimentar e o controle da digestão, estimulando a secreção de enzimas digestórias e de substâncias ácidas ou básicas para promover condições ideais para atividade enzimática. Efeitos sobre a motilidade gastrointestinal também são relacionados a esses hormônios. Em peixes, já foram descritos alguns neuropeptídeos, homólogos aos encontrados em mamíferos, como gastrina (GAS) colecistoquinina (CCK), peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP), neuropeptídeo Y (NPY), dentre outros. O objetivo deste trabalho foi identificar, utilizando a técnica de imunohistoquímica, células produtoras de GAS, CCK-8, CGRP e NPY no trato gastrointestinal do dourado usando anticorpos desenvolvidos contra neuropeptídeos de mamíferos. Foram utilizados cinco espécimes juvenis com peso médio de 144,8 g ± 21,7 g. Os peixes foram submetidos a jejum de 24 h, anestesiados, sacrificados e por fim, retiradas amostras ao longo de todo tubo digestório. As amostras de tecido foram fixadas em Bouin por 12 horas, colocadas em álcool 70% e processadas segundo métodos histológicos de rotina. Para a imunohistoquímica todas as reações foram feitas em câmara úmida, e nos procedimentos de lavagem utilizou-se PBS 0,1 M. O bloqueio da atividade da peroxidase endógena e de ligações inespecíficas foi feito usando reagentes Dako® (DakoCytomation, EUA). As amostras foram incubadas com anticorpos primários policlonais (Bachem, EUA) contra GAS (T-4347), CCK-8 (T-4254), NPY (T-4032) e CGRP (T-4454) de acordo com Vigliano et al. (2011). Posteriomente, lavadas em tampão e incubadas com anticorpo secundário anticoelho (DakoCytomation, EUA). Por fim, os cortes histológicos foram revelados pelo método enzimático utilizando 3,3 tetrahidrocloreto diaminobenzidina, DAB, (DakoCytomation, EUA) e contra-corados com hematoxilina de Carazzi. Todos os anticorpos detectaram seus respectivos neuropeptídeos em CNEs, comprovando a imunorreaçào cruzada. O dourado apresentou CNEs imunoreativas no epitélio e glândulas a CCK-8 na região pilórica estomacal. Por outro lado, CNEs CCK-8 positivas foram visualizadas ao longo de todo o epitélio do intestino médio e posterior. Já para a GAS foram observadas CNEs imunopositivas no epitélio e glândulas nas regiões cecal e pilórica estomacais, além de células no epitélio do intestino médio, posterior e cecos pilóricos. Estruturas imunorreativas para CGRP foram encontradas na camada muscular (plexo mioentérico em fibras nervosas e neurônios) ao longo de todo o tubo digestório, desde esôfago até a parte final do intestino posterior. Também foram observadas CNEs produtoras de CGRP e dispersas no epitélio do estômago e intestino no dourado. De maneira distinta, células imunopositivas para NPY foram principalmente observadas dispersas no epitélio do intestino médio e posterior. Este foi o primeiro estudo a demonstrar o sucesso na identificação, por imunohistoquímica, de GAS, CCK-8, CGRP e NPY no tratogastrointestinal de dourado (Salminus brasiliensis) utilizando anticorpos desenvolvidos contra neuropeptídeos de mamíferos de mamíferos demonstrando a reação cruzada existente fundamentada na grande conservação e homologia estrutural dessas proteínas.