Estudo do sistema neuroendócrino gastrointestinal em tilápia (Oreochromis niloticus)

PEREIRA, R.; ARAÚJO, J.; COSTA, L.; PAULINO, R.; MOURAD, N.; RODRIGUES, E.; MORÓN-ALCAIN, E.; VIGLIANO, F.A.; ROSA, P.

Palmas

Congreso; Aquaciência; 2012

Sociedade Brasileira de Aquicultura e Biologia Aquática (AQUABIO)

O sistema neuroendócrino difuso (SNED) compreende vários tipos de células do trato gastrointestinal, chamadas de células neuroendócrinas (CNEs), que produzem e secretam vários hormônios gastrointestinais, conhecidos como neuropeptídeos. Estas moléculas possuem diversos efeitos sobre o comportamento alimentar e o controle da digestão, estimulando a secreção de enzimas digestórias e de substâncias ácidas ou básicas para promover condições ideais para atividade enzimática. Efeitos sobre a motilidade gastrointestinal também são relacionados a esses hormônios. Em peixes, já foram descritos alguns neuropeptídeos, homólogos aos encontrados em mamíferos, como gastrina (GAS) colecistoquinina (CCK), peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP), neuropeptídeo Y (NPY), dentre outros. O objetivo deste trabalho foi identificar, utilizando a técnica de imunohistoquímica, células produtoras de GAS, CCK-8, CGRP e NPY no trato gastrointestinal da tilápia usando anticorpos desenvolvidos contra neuropeptídeos de mamíferos. Foram utilizados cinco espécimes juvenis com peso médio de 25 g ± 11,3 g. Os peixes foram submetidos a jejum de 24 h, anestesiados, sacrificados e por fim, retiradas amostras ao longo de todo tubo digestório. As amostras de tecido foram fixadas em Bouin por 12 horas, colocadas em álcool 70% e processadas segundo métodos histológicos de rotina. Para a imunohistoquímica todas as reações foram feitas em câmara úmida, e nos procedimentos de lavagem utilizou-se PBS 0,1 M. O bloqueio da atividade da peroxidase endógena e de ligações inespecíficas foi feito usando reagentes Dako® (DakoCytomation, EUA). As amostras foram incubadas com anticorpos primários policlonais (Bachem, EUA) contra GAS (T-4347), CCK-8 (T-4254), NPY (T-4032) e CGRP (T-4454) de acordo com Vigliano et al. (2011). Posteriomente, lavadas em tampão e incubadas com anticorpo secundário anticoelho (DakoCytomation, EUA). Por fim, os cortes histológicos foram revelados pelo método enzimático utilizando 3,3 tetrahidrocloreto diaminobenzidina, DAB, (DakoCytomation, EUA) e contra-corados com hematoxilina de Carazzi. Todos os anticorpos detectaram seus respectivos neuropeptídeos em CNEs. A morfologia das CNEs vistas foi distinta, sendo que no estômago tiveram formato poliédrico com núcleo arredondado enquanto no intestino médio e posterior possuíam forma triangular com núcleo arredondado ou oval situado no meio ou na posição basal. A tilápia apresentou CNEs imunopositivas a CCK-8 e GAS no epitélio de revestimento e glândulas de todas as regiões amostradas do estômago: cárdia, corpo, cecal e pilórica. Por outro lado, apenas no epitélio do primeiro terço do intestino médio foram vistas CNEs produtoras desses neuropeptídeos. Estruturas imunorreativas para CGRP foram encontradas na camada muscular (plexo mioentérico em fibras nervosas e neurônios) ao longo de todo o tubo digestório, desde esôfago até final do intestino posterior. Também são observadas CNEs produtoras de CGRP dispersas no epitélio do estômago e intestino. Células imunopositivas para NPY foram observadas no primeiro terço do intestino médio dispersas no epitélio. Foram ainda observadas estruturas positivas a NPY na camada muscular no intestino médio e posterior. Este foi o primeiro estudo a demonstrar o sucesso na identificação, por imunohistoquímica, de GAS, CCK-8, CGRP e NPY no tratogastrointestinal de tilápia (Oreochromis niloticus) utilizando anticorpos desenvolvidos contra neuropeptídeos de mamíferos demonstrando a reação cruzada existente fundamentada na grande conservação e homologia estrutural dessas proteínas.