Inmovilización orientada de Tiorredoxina sobre polímeros modificados

CARBAJAL MARÍA LAURA.

Ciudad de Bernal, Buenos Aires.

Jornada; Segundas Jornadas de Investigadores e Investigadoras en formación de la Universidad Nacional de Quilmes.; 2002

Universidad Nacional de Quilmes.

Polímeros con afinidad especifica a Tiorredoxina (Trx) y proteínas de fusión a Trx pueden ser de utilidad en el desarrollo de nuevos soportes para el reconocimiento proteico y kits de diagnóstico en estado sólido.El objetivo de este trabajo es demostrar la unión de Trx recombinante modificada con un patch de histidinas (HP-rTrx), a través de diferentes orientaciones específicas, sobre los materiales macroporosos de polisulfona.El Glicildilmetaacrilato (GMA) fue injertado por medio de polimerización por radiaciones para lograr la activación de polisulfona, con cantidades de injerto altamente reproducibles, en el rango de entre 10 y 100%.Posteriormente se realizó la inmovilización química del ácido iminodiacético (IDA) y el fenil arsin oxido (APAO) sobre los materiales modificados con GMA.Luego, la HP-rTrx fue inmovilizada sobre la superficie por medio de dos rutas diferentes, que involucran diferentes orientaciones específicas de la proteína. La primera, involucra la interacción de las tres histidinas de la HP-rTrx con un complejo IDA-Ni+2; mientras que la segunda es mediada por un sitio de coordinación entre APAO y dos cisteínas próximas de la HP-rTrx, que se corresponden con el sitio activo de la enzima.La ocurrencia de la proteína sobre los polímeros fue detectada por reconocimiento de anticuerpos policlonales, y la orientación fue deducida por medio de determinaciones de actividad enzimática sobre el soporte sólido a través de medidas de un sustrato fluorescente.De esta forma, por medio de un cuidadoso procedimiento de injerto por radiación y por una adecuada concentración de ligando, fue posible obtener una inmovilización orientada de proteínas sobre materiales macroporosos de polisulfona.