Observación de la acción fúngica sobre huevos de Toxocara canis mediante microscopía electrónica de barrido

BOJANICH V; GIUSIANO G; MARINO GL; LÓPEZ MA; ALONSO JM; BASUALDO FARJAT JA

Jornada; XIV Jornadas Argentinas de Microbiología. II Jornada de Microbiología e Infectología del NEA ? MINEA 2011.; 2011

Asoc. Argentina de Microbiologia

INTRODUCCIÓN. Los hongos nematófagos comprenden un grupo heterogéneo de más de 2000 especies taxonómicas. Son hongos saprófitos de suelo y algunos utilizan al nematodo o a sus huevos, como fuente nutricional. La interacción hongo-huevo de helmintos existe en la naturaleza y puede ser observada in vitro utilizando como herramientas la microscopía óptica y microscopía electrónica de barrido (MEB). Este último es un instrumento que permite la observación y caracterización superficial de elementos orgánicos, entregando información morfológica y topográfica de la unidad analizada. Entre las ventajas del MEB se puede mencionar la alta resolución (~100 Å), la gran profundidad de campo que le da apariencia tridimensional a las imágenes y la sencilla preparación de las muestras. OBJETIVO. Observar mediante MEB la acción fúngica in vitro sobre huevos de Toxocara canis. MATERIALES Y MÉTODOS. Huevos obtenidos a partir de una hembra adulta de T. canis, fueron enfrentados con tres cepas de hongos aislados de suelos de parques de la ciudad de Corrientes. El ensayo se realizó en placas de Petri con agar agua 2% a 28ºC durante 21 días y se trabajó con un grupo control de huevos al que no se le agregó el cultivo de hongos. Procesamiento de las muestras para la MEB (JEOL-JSM 5800LV): Para la fijación del material se agregó 2 ml de formaldehído 2% v/v por placa y se dejó 48 horas. Luego se centrifugó 5 minutos a bajas revoluciones y el ?pellet? se colocó sobre membranas filtrantes, a las que se sometió a la deshidratación por pasaje en alcohol etílico 10, 30, 50, 70 y 100% durante 15 minutos cada uno. En el Servicio de Microscopía Electrónica de la UNNE el material fue secado a punto crítico con CO2, luego fue montado sobre una placa metálica la que fue sometida a un metalizado con oro durante 3 minutos previo vacío. La observación de la acción fúngica fue evaluada según los criterios de Lysek y colaboradores (1982). DISCUSIÓN DE RESULTADOS. Fueron observadas y fotografiadas 16 muestras, 4 controles y 4 para cada de las 3 cepas fúngicas ensayada. Los efectos de los hongos sobre el huevo de T. canis fueron: hifas adheridas y rodeando los huevos, los cuales aparecen abiertos y se observa la larva en su interior. La formación de estructuras ?appresorias? penetrando la cubierta del huevo y la deformación de la morfológica típica de la membrana del huevo. En los huevos del grupo control, la cubierta del huevo se mantuvo intacta y sin alteraciones morfológicas. CONCLUSIÓN. El uso de la MEB permite distinguir el cambio morfológico y ver estructuras características de la destrucción del huevo generada por el hongo. La observación cualitativa de los efectos destructivos de los hongos sobre los huevos de T. canis nos anima a continuar con los ensayos de manera de poder establecer y clasificar el tipo de actividad ovicida ejercida.