Receptor de serotonina 5HT3A: Bases moleculares de activación y modulación

JEREMIAS CORRADI; FERNANDA GUMILAR; NATALIA ANDERSEN; CECILIA BOUZAT

Los Cocos, Córdoba

Congreso; XXII Reunión anual Sociedad Argentina de Investigación en Neurociencias.; 2007

Sociedad Argentina de Investigación en Neurociencias.

El receptor de serotonina tipo 3A (%-HT3A) es un homopentámero perteneciente a la familia de receptores Cys-Loop. cada subunidad está formada por 4 segmentos transmembranales (M1-M4). M2 forma el poro iónico y M4 es el más externo, en contacto con la membrana. La baja conductancia del canal iónico ha impedido el estudio de este receptor usando la técnica de patch-clamp. Utilizando un mutante del 5-HT3AR de alta conductancia describimos con detalle la activación a nivel de canal único. Los eventos de activación aparecen como aperturas sucesivas separadas por cierres breves. Los histogramas de tiempos de estado abierto son ajustados con tres componentes: breve (150 microseg), intermedio (1-3 ms) y prolongado (aprox. 120 ms). Los registros de corrientes macroscópicas muestran que este receptor se activa por serotonina con una EC50 de 2 micromolar y se desensibiliza lentamente. Para evaluar el rol de M4 mutamos las posiciones 10´ y 14´ y analizamos los cambios funcionales. las mutaciones en 10´ disminuyen aproximadamente 3 veces el componente de estado abuerto de mayor duración, sin afectar la velocidad de desensibilización. Las mutaciones en 14´ no producen cambios significativos en los tiempos de estado abierto y cerrado del canal, pero aumentan aprox. 3 veces la velocidad de desensibilización. Asó, M4 contribuye a la cinética de activación y desensibilización del receptor. Estudiamos además la acción de esteroides que modulan la actividad de otros receptores de la misma familia y para los cuales M4 podría ser el sitio de acción. Los registros de canales en presencia de hidrocortisona muestran una disminución significativa del tiempo de estado abierto y de los períodos de activación, compatible con un bloqueo lento o aumento de la velocidad de desensibilización. Los resultados revelan un alto grado de conservación entre miembros de esta familia de receptores en cuanto al rol funcional del segmento M4 y la modulación por esteroides.